Nahita ZFD013 User manual

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Versión/Version 1, Sept 2017
CUBETA DE ELECTROFORESIS HORIZONTAL
HORIZONTAL ELECTROPHORESIS TANK
Este manual es parte inseparable del aparato por lo que debe estar disponible para todos los
usuarios del equipo. Le recomendamos leer atentamente el presente manual y seguir
rigurosamente los procedimientos de uso para obtener las máximas prestaciones y una mayor
duración del mismo.
This manual should be available for all users of these equipments. To get the best results and
higher duration of this equipment it is advisable to read carefully this manual and follow the
processes of use.

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Versión/Version 1, Sept 2017
Índice de contenidos / Index of contents
Castellano
1. Descripción............................................................................................................................ 3
2. Precauciones de seguridad.................................................................................................... 4
3. Mantenimiento...................................................................................................................... 4
4. Instalación de la cubeta de electroforesis horizontal ........................................................... 5
5. Preparación del gel................................................................................................................ 5
6. Molde y bandeja para hacer el gel........................................................................................ 6
7. Correr el gel ........................................................................................................................... 6
8. Tinción del gel y visualización................................................................................................ 7
9. Soluciones.............................................................................................................................. 7
10. Garantía…………………………………………………………………………………………………………………………….8
English
1. Description ............................................................................................................................ 9
2. Safety instructions................................................................................................................. 9
3. Maintenance........................................................................................................................ 10
4. Setting up the Horizontal Gel Tanks:-.................................................................................. 11
5. Gel Preparation ................................................................................................................... 11
6. Gel Pouring:-........................................................................................................................ 11
7. Running the gel.................................................................................................................... 12
8. Gel Staining and Viewing..................................................................................................... 12
9. Buffer solutions………………………………………………………………………………………………………………12
10. Warranty…………………………………………………………………………………………………………………………13

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Versión/Version 1, Sept 2017
1. Descripción
La cubeta de electroforesis horizontal Nahita está especialmente diseñada para la separación,
identificación y preparación de moléculas de DNA y RNA en geles de agarosa. El equipo se
suministra completo con todos los accesorios necesarios para la preparación y electroforesis
de los geles.
- Tanque de electroforesis: fabricado en material acrílico de alta calidad y en una sola
pieza sin junturas que evitar las fugas de líquido y las roturas. Presenta 4 patas
antideslizantes y 2 electrodos reemplazables de platino puro resistentes a la corrosión
y a elevadas temperaturas.
- Tapa: dispone de dos cables fijos de alimentación con conector tipo banana y de una
ventana transparente para la visualización del gel.
- Molde para la preparación de geles: permite la preparación de geles de 100x78 mm.
- Bandeja para geles: presenta bandas con contraste en color morado que ayudan a la
carga del gel y sirven como guía. Dispone además de ranuras laterales para la
colocación y sujeción de hasta 2 peines paralelos en caso de tener que analizar un
elevado número de muestras al mismo tiempo.
- Peines: el equipo se suministra con peines de 10/15 pocillos y 1/2 mm grosor.
Especificaciones
Referencia ZFD013
Tamaño de gel 100x78 mm
Nº muestras 10/15
Grosor peines 1 y 2 mm
Volumen buffer (approx.) 300 mL aprox.
Máx. voltaje entrada 150 V
Dimensiones 365x105x55 mm
Elementos incluidos
Tanque de electroforesis con electrodos……………………………………………… 1 ud

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Versión/Version 1, Sept 2017
Tapa con cables de conexión……………………………………………………………….. 1 ud
Bandeja para geles de 100x78 mm………………………………………………………. 1 ud
Molde para geles…………………………………………………………………………………. 1 ud
Peine 10 muestras (1 mm grosor)………………………………………………………… 2 uds
Peine 10 muestras (2 mm grosor)………………………………………………………… 2 uds
Peine 15 muestras (1 mm grosor)………………………………………………………… 2 uds
Peine 15 muestras (2 mm grosor)……………………………………………………….. 2 uds
2. Precauciones de seguridad
- Cuando se utilizan adecuadamente, estos equipos no suponen ningún riesgo para la
salud. Sin embargo, estos dispositivos pueden transmitir niveles peligrosos de
electricidad y por tanto deben ser utilizados únicamente por personal cualificado y
siempre siguiendo las líneas marcadas en este manual de uso.
- Cualquier persona que vaya a utilizar el equipo debe leer detenidamente el manual de
uso.
- La cubeta de electroforesis no debe utilizarse nunca sin la tapa de protección
correctamente colocada.
- La cubeta de electroforesis no debe utilizarse si hay algún signo de daño externo tanto
en el tanque como en la tapa.
3. Mantenimiento
Limpieza de la cubeta horizontal
El mejor método para la limpieza de la unidad es utilizar agua templada y un detergente suave.
Atención!: Si utiliza agua a temperaturas superiores a 60ºC puede dañar la unidad y sus
componentes.
La cubeta de electroforesis debe que ser enjuagada con agua tibia o agua destilada para
prevenir la acumulación de sales, pero poniendo mucho cuidado en no dañar el electrodo y no
es necesaria ni recomendable una limpieza vigorosa.
Se recomienda secar al aire.
Las cubetas solo deben limpiarse con:
- Agua templada con una concentración pequeña de un detergente suave o jabón.

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- Los detergentes compatibles incluyen detergente de lavavajillas, hexano e
hidrocarburos alifáticos.
- No debe dejar la cubeta de electroforesis más de 30 minutos en el detergente.
- La cubeta no debe estar nunca en contacto con los siguientes agentes de limpieza ya
que pueden causar daños irreversibles: acetona, fenol, cloroformo, tetracloruro de
carbono, metanol, etanol y alcohol isopropílico.
Descontaminación de RNAsas
Se puede realizar la descontaminación de la siguiente forma:
- Limpie la unidad con un detergente suave como se ha descrito en el apartado anterior.
- Limpie con un 3% de peróxido de hidrogeno (H2O2) durante 10 minutos.
- Enjuague con agua destilada tratada con un 0.1% DEPC (dietil-pirocarbonato).
Cuidado!: el DEPC es un potencial carcinógeno. Tome todas las precauciones
necesarias para su manipulación.
- También puede utilizarse RNaseZAPTM (Ambion). Por favor, consulte las instrucciones
de uso para cubetas de gel acrílicas.
4. Instalación de la cubeta de electroforesis horizontal
Instrucciones para la colocación de los cables de electrodo:
1. Fíjese en la posición de la tapa de la cubeta. Esto le indica la polaridad y la orientación
correcta de los cables, el cable negro es el negativo y el rojo el positivo.
2. Retire la tapa de la cubeta; si no retira la tapa, el ajuste d elos cables puede dar lugar a un
aflojamiento de la clavija de oro y a daños e el electrodo.
3. Enrosque los cables en los orificios roscados tanto como sea posible de manera que no
quede hueco entre la tapa y el borde del conector del cable.
4. Vuelva a colocar la tapa.
5. Preparación del gel
1. Para un gel estándar al 0,7% de agarosa, añadir 0.7 g de agarosa en 100 ml de solución
TAE o TBE 1x. El mismo tipo de solución 1x debe que ser utilizada para llenar la cubeta de
electroforesis.
2. Añada la agarosa en polvo a un Erlenmeyer
3. Añada la cantidad adecuada de solución TAE o TBE 1x. Para evitar la evaporación tape el
Erlenmeyer con parafilm.

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4. Disuelva la agarosa calentándola en una placa calefactora con agitación o en un
microondas. Si utiliza el microondas, la potencia deberá ser de unos 400 W (o potencia
media) y deberá agitar el Erlemeyer cada minuto. La solución debe calentarse hasta que
todos los cristales de agarosa se hayan disuelto. Esto se comprueba mejor sobre fondo
claro; los cristales aparecen como cristales traslúcidos. Si no se disuelven completamente
pueden interferir en la migración de las muestras y dar falsos resultados. El gel debe
dejarse enfriar hasta 50 - 60º C antes de verterlo en el molde para geles.
6. Molde y bandeja para preparar el gel
1. Coloque el molde para el gel sobre una superficie horizontal y coloque una bandeja para
geles en su interior. Para evitar fugas del gel, los extremos de la bandeja deberán quedar
perfectamente ajustados contra las paredes del molde.
2. Coloque los peines en las ranuras de la bandeja.
3. Vierta la agarosa líquida con cuidado para no generar burbujas
4. Deje que la agarosa gelifique por sí misma.
5. Retire con cuidado el peine hacia arriba y pase la bandeja con el gel a la cubeta de
electroforesis.
7. Correr el gel
1. Mezcle la muestra con la solución de carga (ver el punto 6. Soluciones)
2. Llene la cubeta con la solución de electroforesis (TAE o TBE) hasta cubrir el gel con al
menos 1 mm de solución. De este modo se acortará el tiempo de electroforesis y la
resolución será mayor.
3. Cargue las muestras en los pocillos mediante una pipeta automática. Se pueden utilizar
pipetas multicanal para cargar los pocillos si son compatibles con las separaciones del
peine.
4. Coloque cuidadosamente la tapa de la cubeta y conéctela a la fuente de alimentación.
5. Generalmente los geles corren a bajo voltaje 90 –50 V. Nota: voltajes más altos permiten
una electroforesis más rápida pero de peor resolución.
6. Encienda la fuente de alimentación para correr el gel.

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8. Tinción y visualización del gel
1. Coloque el gel durante 15 –30 min en una cubeta de tinción con el volumen adecuado de
solución de bromuro de etidio 0.5ug/ml (ver el punto 6. Soluciones). La cubeta de tinción
debe estar cerrada.
Nota: el bromuro de etidio es una sustancia cancerígena por lo que será necesario tomar
las precauciones necesarias para su manipulación.
2. Deje el gel en agua destilada durante unos 10 - 30 min para eliminar el exceso de tinción
asegurándose de que queda completamente sumergido.
3. Enjuague dos veces el gel en agua destilada durante un par de segundos.
4. Coloque el gel en un transiluminador de luz UV.
5. Las muestras se verán como bandas claras y brillantes al ser visualizadas o fotografiadas
en con un sistema de documentación de geles. Si las bandas se ven débiles habrá que
ajustar el proceso de tinción con bromuro de etidio reduciendo el tiempo de lavado, si por
el contrario se observa demasiado fondo, habrá que aumentar el tiempo de aclarado del
gel.
9. Soluciones
1x TAE –40 mM tris (PH 7.6), 20 mM ácido acético, 1 mM EDTA.
Para 1 L de TAE 50X disolver en 750 mL de agua destilada:
•242 g tris base (FW=121)
•57.1 mL ácido acética glacial
•100 mL EDTA 0.5 M (PH 8.0)
•Completar hasta 1 L con agua destilada
1X TBE –89 mM tris (PH 7.6), 89Mm ácido bórico, 2mM EDTA
Para 1 L de TBE 10x disolver en 750 mL de agua destilada:
•108 g tris base (FW=121)
•55 g ácido bórico (FW=61.8)
•40 mL EDTA 0.5 M (PH 8.0)
•Completar hasta 1 L con agua destilada.
Solución de carga

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La solución stock de carga 10x consiste en: 50% glicerol, 0.25% azul de bromofenol y 0.25%
xileno cianol FF en solución TAE 1x. Solo es necesario preparar 1-10ml de la solución de carga
10x.
Solución de bromuro de etidio
Añada 10 mg de bromuro de etidio a 1 mL de agua destilada. Nota: el bromuro de etidio es
una sustancia cancerígena por lo que será necesario tomar las precauciones necesarias para su
manipulación.
10.Garantía
La cubeta de electroforesis horizontal y sus componentes (excepto el cable de platino) está
cubierta por 1 año de garantía contra defectos de materiales y fabricación. Los siguientes
supuestos están específicamente excluidos de la garantía:
- Defectos causados por un uso inadecuado
- Reparaciones o modificaciones realizadas por personal no autorizado
- Uso de cables o conectores no especificados por el fabricante para esta cubeta de
electroforesis
- Mal uso deliberado o accidental
- Daños causados por desastres naturales
Para cualquier aclaración o en caso de necesitar enviar el equipo para su reparación, contacte
a su distribuidor.

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Versión/Version 1, Sept 2017
1. Description
Nahita horizontal electrophoresis cell is specially designed for separating, identifying and
preparing DNA and RNA molecules in agarose gels. The cell is supplied complete with all the
necessary accessories for casting and running the gels:
- Electrophoresis tank: made of a unique seamless high quality acrylic material piece to
avoid leakage and breakage. It presents 4 antiskid legs and 2 replaceable electrodes
made of pure platinum and resistant to corrosion and high temperatures.
- Lid: it has two fixed power leads with banana connector to be plugged to a power
supply and a transparent window for gel visualization.
- Moulds for gel casting: it is used to cast gels of size 100x78 mm.
- Gel tray: with dark colour contrast bands to facilitate well visualization and thus make
easier sample loading. It also provided with lateral grooves to place up to 2 parallel
combs in case of being necessary to analyze a high number of samples at the same
time.
- Combs: the cell is supplied with combs for 10/15 wells and ½ mm thickness
Specifications
Code ZFD013
Gel size 100x78 mm
Nº of samples 10/15
Comb thickness 1 and 2 mm
Buffer volume (approx.) 300 mL approx.
Max. input voltage 150 V
Dimensions 365x105x55 mm
Included parts
Electrophoresis tank with electrodes…………………………………………………… 1 ud
Lid with connection cables….……………………………………………………………….. 1 ud
Tray for gels 100x78 mm…………………………..…………………………………………. 1 ud
Mould for gels…..…………………………………………………………………………………. 1 ud
Comb for 10 samples (1 mm thickness)………………………………………………… 2 uds

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Comb for 10 samples (2 mm thickness)………………………………………………… 2 uds
Comb for 15 samples (1 mm thickness)………………………………………………… 2 uds
Comb for 15 samples (2 mm thickness)………………………………………………… 2 uds
2. Safety instructions
- When used correctly, these units has no health risk. However, these units can deliver
dangerous levels of electricity and are to be operated only by qualified personnel
following the guidelines laid out in this instruction manual.
- Anyone intending to use this equipment should read the complete manual thoroughly.
- The unit must never be used without the safety lid correctly in position.
- The unit should not be used if there is any sign of damage to the external tank or lid.
3. Maintenance
Cleaning Horizontal Units
Units are best cleaned using warm water and a mild detergent. Attention!: Water at
temperatures above 60℃can cause damage to the unit and components.
The tank should be thoroughly rinsed with warm water or distilled water to prevent build up of
salts but care should be taken not to damage the enclosed electrode and vigorous cleaning is
not necessary or advised.
Air drying is preferably before use.
The units should only be cleaned with the following:-
- Warm water with a mild concentration of soap or other mild detergent.
- Compatible detergents include dishwashing liquid, Hexane and Aliphatic hydrocarbons.
- The units should not be left in detergents for more than 30 minutes.
- The unit should never come into contact with the following cleaning agents, these
will cause irreversible and accumulative damage: Acetone, Phenol, Chloroform,
Carbon tetrachloride, Methanol, Ethanol, Isopropyl alcohol.
RNAse Decontamination
This can be performed using the following protocol:
- Clean the units with a mild detergent as described above.
- Wash with 3% hydrogen peroxide (H2O2) for 10 minutes.

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- Rinse with 0.1% DEPC-(diethyl pyrocarbonate) treated distilled water. Caution!: DEPC
is a suspected carcinogen. Always take the necessary precautions when using.
- RNaseZAPTM (Ambion) can also be used. Please consult the instructions for use with
acrylic gel tanks.
4. Setting up the Horizontal Gel Tanks:-
Instructions for fitting Electrode Cables
1. Note the position of the lid on the unit. This shows the correct polarity and the correct
orientation of the cables, black is negative and red positive.
2. Remove the lid from the unit, Note if the lid is not removed, fitting the cables may result
in un-tightening of the gold plug and damage to the electrode.
3. Screw the cables into the tapped holes as fully as possible to that there is no gap
between the lid and the leading edge of the cable fitting.
4. Refit the lid.
5. Gel Preparation
1. For a standard 0.7% agarose gel, add 0.7 g of agarose to 100 mL of 1x TAE or TBE solution.
The same 1x solution should be used in the tank buffer solution.
2. Add the agarose powder to a conical flask.
3. Add the appropriate amount of 1X TAE or TBE solution. To prevent evaporation during the
dissolving steps below, the conical flask should be covered with parafilm.
4. Dissolve the agarose powder by heating the agarose either on a magnetic hot plate with
stirring bar or in a microwave oven. If using the microwave method, the microwave
should be set at around 400 watt or medium setting and the flask swirled every minute.
The solution should be heated until all crystals are dissolved. This is best viewed against a
light background. Crystals appear as translucent crystals. These will interfere with sample
migration if not completely dissolved.
5. The gel must be cooled to between 50º C and 60ºC before pouring.
6. Gel Pouring
1. Put the gel mold onto a level surface and put a fit gel tray into it. In order to prevent gel
leaking, both ends of gel tray must be closely against the gel box.
2. Place the comb(s) onto the tray.
3. Pour agarose carefully so as not to generate bubbles.
4. Leave the gel by itself and wait it to concrete.

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5. Pull the comb(s) out carefully and move the tray with gel to the main tank.
7. Running the gel
1. Mix the sample with loading buffer (see point 6. Solutions).
2. Pour buffer (TAE or TBE) into the tank till the gel is immersed, almost 1 mm higher. Thus
will complete the experiment in shorter time and better quality of sample resolution.
3. Load the samples into the wells with pipette. Multi-channel pipettes can be used with MC
compatible combs to load samples.
4. Carefully cover the tank with lid and connect it with a power supply.
5. Typically gels run under 90V- 50V. Be noted that, generally higher voltage enables faster
electrophoresis but poorer quality of sample resolution.
6. Run electrophoresis.
8. Gel Staining and Viewing
1. Put the gel containing the appropriate volume of 0.5ug/ml ethidium bromide to a
staining box and stain for 15~30 minutes, see solutions (P11)for stock stain
concentration and adjust to the volume used accordingly. The staining box should be
covered.
Note: Ethidium bromide is a suspected carcinogen and the necessary safety
precautions should be undertaken.
2. De-stain the gel for 10~30 minutes in distilled water again ensuring the gel is
completely immersed.
3. Rinse the gel twice for a couple of seconds with distilled water.
4. Put the gel in a UV Transilluminator.
5. The samples will often appear as brighter, clearer bands when photographed or
viewed using a gel documentation system. However if the gel bands are too faint then
the staining procedure should be adjusted so that there is less de-staining. If there is
too much background then the staining procedure should be adjusted so that there is
more de-staining.
9. Buffer solutions
1x TAE 40mM tris (PH 7.6), 20 mM acetic acid, 1 mM EDTA.
To prepare stock of TAE 50X (1L) dissolve in 750 ml of distilled water:
•242 g tris base (FW=121)
•57.1 mL glacial acetic acid

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•100 mL 0.5 M EDTA (PH 8.0)
•Fill to 1 L with distilled water.
1X TBE 89 mM tris (PH 7.6), 89 mM boric acid, 2 mM EDTA
To prepare stock of TBE 10x (1L) dissolve in 750ml of distilled water:
•108 g tris base (FW=121)
•55 g boric acid (FW=61.8)
•40 mL 0.5 M EDTA (PH 8.0)
•Fill to 1 L with distilled water.
Sample Loading Dye
10x sample buffer stock consists of 50% glycerol, 0.25% bromophenol blue, and 0.25% xylene
cyanole FF in 1x TAE buffer. Only 1-10 mL of the 10x loading dye should be prepared.
Ethidium Bromide Solution
Add 10 mg of Ethidium Bromide to 1ml distilled water. Caution: Ethidium bromide is a
suspected carcinogen. Always take the necessary precautions when using.
10.Guarantee
The horizontal electrophoresis tank and its components (except platinum wire) are warranted
for 1 year against defects in materials and workman ship. However, the following defects are
specifically excluded:
- Defects caused by improper operation
- Repair or modification done by non-authorized staff
- The use of cables or connectors not specified by manufacturer for this electrophoresis
cell.
- Deliberate or accidental misuse
- Damages caused by disasters
For any inquiry or request for repair service, please contact your local distributor.