Agilent Technologies GPC/SEC User manual

GPC/SEC
Column User Guide
カラムユーザーガイド
色谱柱用户指南
Manual do usuário
de colunas

2
Installation
Tubing and connectors
Stainless steel tubing of 1/16 in od and
0.12 mm id or 0.17 mm id is recommended
for column connections of analytical columns,
and 0.5 mm id for 25 mm preparative columns.
Connecting tubing lengths between columns,
detectors and injection volumes should be
minimized to avoid excessive dead volume
which will diminish system performance.
Column connections should be made using
Parker compatible 1/16 in nuts and ferrules. The
compatibility of column connectors is illustrated
in Figure 1.
Figure 1. Compatible connectors
The distance “X” for the standard column end
tting is 0.090 in and a minimum male nut
length of 0.210 in is required. Some ttings from
other manufacturers may not be compatible, for
example Waters and Rheodyne. If unsure, please
contact Agilent Technologies.
Column connection
Connect the GPC column in the eluent ow
direction indicated and tighten the 1/16 in nut
and ferrule using wrenches on the 1/16 in nut
and the actual end tting.
It is recommended that several drops of eluent
have been pumped before the column outlet
is connected to another column or detector to
clean out the end tting of any particulate matter
which may be present.
To avoid loosening the end ttings and causing
leaks, wrenches must be used on the end tting
adjacent to the connecting nut and NOT on the
column barrel or the opposite end tting,
see Figure 2.
Figure 2. Do not use wrenches on the ats
English

3
Eluent Flow Rate
For conventional GPC columns using 7.5 and 7.8
mm id columns, 1.0 mL/min is an optimum ow
rate for most separations. When column id is
increased or decreased, the volumetric ow rate
should be adjusted accordingly in order to give
an equivalent linear velocity through the column.
The recommended ow rates are given in
Table 1, however, in order to avoid excessively
high pressures, higher viscosity eluents should
be used at reduced ow rates or elevated
temperature. Flow rates should be changed
progressively and pressure pulses limited. At no
time should the maximum operating pressure of
the column be exceeded (see Table 4).
Table 1. Recommended ow rate
Column Typical ow rates
(mL/min)
Recommended ow
rate (mL/min)
2.1 mm id 0.04 – 0.1 0.06
4.6 mm id 0.2 – 0.5 0.3
7.5 & 7.8
mm id
0.5 – 1.5 1.0
10 mm id 2.0 – 5.0 2.0
25 mm id 5.0 – 20.0 10.0
Sample Preparation and Injection
If maximum resolution and expected column
lifetime are to be achieved, care must be taken in
sample preparation.
To avoid blockage of the column frits, sample
ltration is recommended (0.5 – 2.0 μm porosity
depending on MW). A guard column will further
protect the columns with little detrimental effect
on performance.
Optimum sample volumes and concentrations
are best determined for each type of analysis
and are dependent on sample MW. Broad
distribution polymer can generally be injected at
higher concentrations than lower polydispersity
samples. Overloading will not damage the
column, but distorted peaks and therefore
spurious results will be obtained.
Excessive injector loop volume can contribute
to band broadening and reduce system
performance, particularly with high efciency or
narrow bore columns. Agilent’s injection volume
recommendations are shown in Table 2.
Table 2. Injection volume recommendations
Column Recommended
concentration (%)
Recommended
injection (µL) per
column
2.1 mm id 0.01 – 0.2 0.2 – 2
4.6 mm id 0.01 – 0.2 1 – 20*
7.5 & 7.8 mm id 0.05 – 0.5 20 – 50**
10 mm id 0.05 – 0.5 20
25 mm id 0.5 – 5.0 500 – 2,000
* PL Multisolvent, MesoPore and ResiPore are 1 – 10 µL.
** PL Multisolvent, MesoPore and ResiPore are 10 – 20 µL,
PL Rapide/PL Rapide Aqua are 20 µL
English

4
Eluents
All eluents should be of high purity and should be
ltered and degassed prior to use.
GPC columns can be transferred to other
eluents. When transferring to another eluent,
miscibility and viscosity of the new eluent are of
primary consideration. See Figure 3 for 7.5 mm
id columns. For other id columns, apply the ow
rate shown in Table 1.
When heating or cooling columns in high
viscosity eluents (for example, TCB, NMP,
DMF) a low solvent ow rate must always be
maintained. Typically, 0.2 mL/min for 7.5 mm id
and 0.1 mL/min for 4.6 mm id should be used
prior to raising the temperature, see Figure 3.
Organic
Organic GPC columns are compatible with
an extensive range of organic solvents
ranging in polarity from peruoroalkanes to
dimethylformamide. Mixed organic solvent
systems can also be used, but water should not
be used except at concentrations less than 10%
by volume in a miscible organic eluent. Columns
are normally supplied in ethylbenzene unless
otherwise stated, and can be ushed directly
from ethylbenzene to THF at 0.5 mL/min.
Unstabilized THF (for example, HPLC grade) is
not recommended as an eluent due to the attack
of peroxide on the gels.
Aqueous and polar
Aqueous/polar GPC columns are normally
supplied in water containing 0.02% sodium azide.
Buffered eluent systems within the pH range
2 – 10 (of high and low ionic strength) may be
used, with no detrimental effect on the column.
When transferring from one eluent to another
the compatibility and solubility of any salts or
additives must be checked to prevent on-column
precipitation which would irreversibly damage
the column. PolarGel columns are compatible
with an extensive range of organic solvents and
with aqueous based eluents. Mixed organic
solvent systems can be used, assuming full
miscibility of the components. The only organic
solvent which is recommended for use with the
PL aquagel-OH and PL Rapide Aqua columns is
methanol (up to 50% by volume).
PL Multisolvent
PL Multisolvent columns are supplied in
stabilized THF, and may be transferred directly
to organic solvents, or to pure water and then
to buffer. Unstabilized THF (for example, HPLC
grade) is not recommended as an eluent due
to the attack of peroxide on the gels. Buffered
eluents within the pH range 2 – 8.5 (of high
and low ionic strength) may be used. When
transferring from one eluent to another the
compatibility and solubility of any salts or
additives must be checked to prevent on-column
precipitation which would irreversibly damage
the column. Polar organic solvents, such as
DMF, DMSO, or DMAc are not recommended as
eluents.
English

5
Organic columns (PLgel; PlusPore; PL Rapide)
Column supplied in ethylbenzene
Transfer to
low viscosity
solvents e.g.
THF, Chloroform,
Dichloromethane
Transfer
to medium
viscosity
solvents e.g.
Toluene, DMF,
DMSO, HFIP
Transfer to
high viscosity
solvents e.g.
TCB, m-Cresol,
NMP
Flush column
with acetone at
0.5 mL/min for 2
column volumes
Flush column
with acetone at
0.5 mL/min for 2
column volumes
Set column oven
to 50 °C, ow at
0.1 mL/min
Flush with new
eluent at
0.5 mL/min for 2
column volumes
Flush with new
eluent at
0.2 mL/min for 2
column volumes
Flush column
direct with new
eluent** at 50 °C
at 0.1 mL/min for
2 column volumes
Increase column
temperature to
30 - 40 °C* as
required for
analysis at
1 °C/min
Increase column
temperature to
50 - 80 °C* as
required for
analysis at
1 °C/min
Increase column
temperature to
100 - 220 °C*
as required for
analysis at
1 °C/min
Operate column
in new eluent at
required ow rate
Operate column
in new eluent at
required ow rate
Operate column
in new eluent at
required ow rate
*Always ensure operating temperature is at least 10 °C below
boiling point of solvent. **Always ensure miscibility. If unsure,
use acetone at room temperature.
Figure 3. Eluent transfer guide
English
Aqueous & Polar columns
(PolarGel, PL aquagel-OH, PL Rapide Aqua)
Column supplied in water containing 0.02% NaN3
Transfer to
aqueous e.g.
Water, Buffer
Transfer to polar
organic** e.g.
DMSO, DMF
Transfer to
mixed solvent
systems e.g.
Water/THF*,
Water/methanol*
Flush column with
pure water at
1.0 mL/min for 2
column volumes
Flush column
with pure water at
1.0 mL/min for 2
column volumes
Flush column
with pure water at
1.0 mL/min for 2
column volumes
Flush with new
buffer at
1.0 mL/min for 2
column volumes
Flush with
acetone at 0.5
mL/min for 2
column volumes
Flush with new,
premixed
eluent at
0.2 mL/min for 2
column volumes
Increase column
temperature*
as required for
analysis at
1 °C/min
Flush with new
eluent at
0.2 mL/min for 2
column volumes
Increase column
temperature*
as required for
analysis at
1 °C/min
Operate column
in new eluent at
required ow rate
Increase column
temperature to
50 - 80 °C* as
required for
analysis at
1 °C/min
Operate column
in new eluent at
required ow rate
Operate column
in new eluent at
required ow rate
*Always ensure operating temperature is at least 10 °C below
boiling point of solvent. ** Polargel only
Multisolvent columns (PL Multisolvent)
Column supplied in THF containing 0.015% BHT
Transfer to aqueous e.g.
Water, Buffer
Transfer to organic e.g.
Chloroform*
Dichloromethane**
Flush column with pure water
at 1.0 mL/min for 2 column
volumes
Flush with new eluent at
0.5 mL/min for 2 column
volumes
Flush with new buffer at
1.0 mL/min for 2 column
volumes
Increase column
temperature as required for
analysis at 1 °C/min
Increase column temperature
as required for analysis at
1 °C/min
Operate column in new
eluent at required ow rate
Operate column in new eluent
at required ow rate
*Always ensure operating temperature is at least 10 °C below
boiling point of solvent

6
Column Testing and Specications
Every column is supplied with a test certicate
indicating the test conditions and the column
performance. Measurements of column
performance are described below:
N = 5.54 []
t
W1/2
2
N = 25 t
W5δ
Efciency (1/2 ht)
(Plates/m)
Efciency (5δ)
(Plates/m)
Symmetry a/b
Where “t” is the peak elution time, “W1/2“ is the
peak width at half peak height, “W5σ” is the peak
width at 4.4% of peak height, “L” is the column
length in meters and “a” and “b” are the peak
widths either side of the perpendicular measured
at 10% of peak height.
Column efciency is dependent on many
experimental factors (system dead volume,
eluent, ow rate, test probe, temperature, and
so forth) and test results may differ from those
quoted on the column certicate due to variability
in these parameters. Band broadening effects
are more severe when using high efciency and/
or narrow bore GPC/SEC columns. It is vital to
ensure that the system dispersion is minimized
in order to obtain the full potential of Agilent
columns.
We recommend measuring performance when a
column set is rst used and at regular intervals after
that. Consider replacing columns when efciency
falls below 80% of the starting value.
Table 3. Column specications
Column Typical
operating
pressure
psi (bar)
Maximum
operating
pressure psi
(bar)
Maximum
operating
temp. °C2
PLgel 3 µm 750 (50) 2,700 (180) 110
PLgel 5 µm 450 (30) 2,200 (150) 150
PLgel 9 & 10 µm 150 (10) 2,200 (150) 220
PLgel 20 µm 50 (3) 2,200 (150) 220
PLgel Olexis 90 (6) 2,250 (150) 220
PLgel Prep 10 µm 350 (25) 2,200 (150) 150
PolyPore 450 (30) 2,200 (150) 160
ResiPore 750 (50) 2,700 (180) 120
MesoPore 750 (50) 2,700 (180) 120
OligoPore 450 (30) 1,500 (100) 120
PL Rapide-F 350 (25) 1,500 (100) 150
PL Rapide-L 225 (15) 1,100 (75) 150
PL Rapide-M 75 (5) 1,100 (75) 220
PL Rapide-H 75 (5) 1,100 (75) 220
PolarGel 450 (30) 1,600 (112) 80
PL aquagel-OH 5 µm 900 (60) 1,600 (112) 90
PL aquagel-OH 8 µm 450 (30) 1,600 (112) 90
PL aquagel-OH 15 µm 150 (10) 1,600 (112) 90
PL Rapide Aqua 225 (15) 1,600 (112) 90
PL Multisolvent
(Water)
1450 (100) 1,600 (112) 80
PL Multisolvent
(Organic)
750 (50) 1,600 (112) 80
1Based on THF (organic columns) or H20 (aqueous columns) at
20 °C, 4.6 mm id at 0.3 mL/min, 7.5 mm id at 1.0 mL/min, 10 mm
id at 1.8 mL/min (2 mL/min for PL Rapide 10 x 100 mm) and
25 x 300 mm at 10 mL/min.
2At very high temperatures, column lifetimes are likely to be
reduced. OligoPore and PL Rapide-F may show deterioration to
lifetimes at >80°C, while PL Multisolvent may degrade at > 50 °C.
Amend ow rates and temperatures accordingly.
[]
/L
2
/L
English

7
Storage
On removing the column from the system,
the end plugs must be replaced to prevent the
column from drying out by evaporation, since
subsequent shrinkage of the gel and disruption
of the packing will occur. The end plugs
need only be applied nger-tight. All eluents
mentioned previously are suitable for storage,
but unstabilized THF and halogenated solvents
should not be used.
For long term storage of aqueous columns, ush
with water and store in water containing 0.02%
sodium azide.
Warranty
The columns are covered by warranty for 90
days following delivery. For columns used
at or above 170 °C, the warranty period
is reduced to 30 days. Agilent Technologies
cannot accept liability from improper handling
and use of columns above their maximum
operation temperature and pressure (see Table
3) and void the warranty. For a full warranty
statement, please request Agilent’s General
Conditions of Sale.
Maintenance
Deterioration in column performance may occur
as a result of damage to the packed bed or as
a result of blockage in the column frits. In the
case of frit blockage, the column can be reverse
ushed for 1 minute at the recommended ow
rate to remove loosely retained material. If a
column blockage exists despite back ushing,
then some column inlet frits can be replaced by
following the procedure outlined below.
English

8
Frit replacement procedure
1. Seal the end tting at the outlet end of the
column. Clamp the column vertically with the
inlet end uppermost. Undo the end tting on the
inlet end of the column and gently remove it. (For
aqueous columns, ush eluent into water prior to
this procedure.)
2. After removing any gel from the end tting,
remove the frit, seal and spreader with the frit
removal tool, and wash all traces of gel from
the end tting. Then place a new frit, seal and
spreader in the bottom of the end tting and
ensure that they are properly seated.
3. Some gel (up to 2 mm) may have expanded
out of the column. Using a spatula, place a dome
of repair gel onto the top of the column and
add sufcient solvent to bind the gel particles
together.
4. Hold the column at an angle of 45° pointing
downwards and replace the end tting complete
with frit, seal and spreader onto the column.
Tighten the end tting one at past nger-tight.
5. Back ush the column with eluent at 0.5
mL/min to remove trapped air. Check for gel
particles in the eluent in case the frit has not
seated correctly. Return the column to normal
ow conditions and check the pressure drop and
column efciency.
Agilent recommends that preparative columns
are returned to Agilent for tment of replacement
frits or repair, however, a similar procedure to the
above can be applied if necessary. For further
technical assistance, or to use the Column Repair
Service, please contact Agilent Technologies.
English

9
日本語版
取り付け
チューブとコネクタ
分析カラムのカラム接続には外径 1/16 インチ、
内径 0.12 mm または 0.17 mm のステンレスス
チールチューブを、25 mm 分取カラムには内径
0.5 mm のステンレススチールチューブを推奨
します。システムパフォーマンスの低下を招く
デッドボリュームの増加を防ぐには、カラム、
検出器、インジェクター間の接続チューブの長
さをできるだけ短くする必要があります。カラ
ム接続には、Parker 互換 1/16 インチナットと
フェラルを使用します。図１に、カラムコネク
タの互換性を示します。
図１. 互換コネクタ
標準カラムエンドフィッティングの距離 “X” は
0.090 インチであるため、長さ 0.210 インチ以上
のオスナットが必要です。Waters、Rheodyne
など、他の製造元の一部のフィッティングは、
使用できない可能性があります。ご不明の場合
は、アジレント・テクノロジーにお問い合わせ
ください。
カラム接続
溶離液が示された向きに流れるように GPC カラ
ムを接続し、1/16 インチナットと実際のエンド
フィッティング上でスパナを使って、1/16 イン
チナットとフェラルを締めます。
カラム出口を別のカラムまたは検出器に接続す
る前に、溶離液を数滴ポンプで送り、存在する
可能性のある粒子状物質をエンドフィッティン
グから追い出すことを推奨します。
エンドフィッティングが緩んで漏れが生じるの
を防ぐため、スパナは、カラムバレルや反対側
のエンドフィッティング上ではなく、接続ナッ
トに隣接するエンドフィッティング上で使用し
てください ( 図２を参照してください )。
図 2. スパナをフラット上で使用しない
フラット

10
溶離液の流速
内径 7.5 mm または 7.8 mm のカラムを使用す
る従来の GPC カラムの場合、流速 1.0 mL/min
がほとんどの分離に適しています。カラムの内
径がそれより大きいか、小さいときには、カラ
ムを通過する際に同等の線速度が得られるよう
に、内径に合わせて流量を調整する必要があり
ます。
表 1 に、推奨流速を示します。ただし、圧力が
過剰に高くなるのを防ぐために、粘度の高い溶
離液を使用する場合は、流速を遅くするか、昇
温してください。流速を徐々に変化させ、脈流
を抑えます。カラムの最大稼働圧を超えてはな
りません ( 表４を参照してください )。
表１. 推奨流速
カラム 代表流速
（mL/min）
推奨流速（mL/min）
内径 2.1 mm 0.04 ～ 0.1 0.06
内径 4.6 mm 0.2 ～ 0.5 0.3
内径 7.5/7.8
mm
0.5 ～ 1.5 1.0
内径 10 mm 2.0 ～ 5.0 2.0
内径 25 mm 5.0 ～ 20.0 10.0
サンプル前処理と注入
最高の分離能と期待されるカラム寿命を達成す
るには、サンプルの前処理に注意を払う必要が
あります。
カラムフリットの目詰まりを防ぐため、サンプ
ルのろ過を推奨します (MW に応じた 0.5 ～ 2.0
μ m の多孔質フィルタ )。ガードカラムは、パ
フォーマンスへの悪影響がほとんどないため、
カラムの保護に有効です。
分析のタイプごとに最適なサンプル量と濃度が
決定されており、値はサンプルの MW に依存し
ます。通常、分子量分布の広いポリマーは、多
分散性の低いサンプルより高濃度で注入できま
す。過剰添加によってカラムが損傷を受けるこ
とはありませんが、ピークが歪むため、偽の結
果が現れます。
インジェクターのループ容量が大きすぎると、
特に高速高分離カラムやナローボアカラムで、
バンドが広がり、システムパフォーマンスが低
下する可能性があります。表２に、アジレント
の推奨する注入量を示します。
表 2. 注入量の推奨値
カラム 推奨濃度（%） カラムあたりの
推奨注入（µL）
内径 2.1 mm 0.01 ～ 0.2 0.2 ～ 2
内径 4.6 mm 0.01 ～ 0.2 1 ～ 20*
内径 7.5/7.8 mm 0.05 ～ 0.5 20 ～ 50**
内径 10 mm 0.05 ～ 0.5 20
内径 25 mm 0.5 ～ 5.0 500 ～ 2,000
* PL Multisolvent、MesoPore と ResiPore は 1 ～ 10 µL.
** PL Multisolvent、MesoPore と ResiPore は 10 ～ 20 μ L、
PL Rapide/PL Rapide Aqua は 20 μ L
溶離液
すべての溶離液は、高純度であり、使用前に
フィルタでろ過し、脱気する必要があります。
GPC カラムを別の溶離液に置き換えることがで
きます。別の溶離液に置き換える際には、まず
新しい溶離液の混和性と粘性を検討します。内
径 7.5 mm のカラムの場合、図 3 を参照してく
ださい。その他の内径のカラムには、表１の流
速を適用してください。
日本語版

11
日本語版
粘性の高い溶離液 (たとえば、TCB、NMP、
DMF) 中でカラムを加熱または冷却する際には、
低い溶媒の流速を常に保持する必要がありま
す。通常、昇温前は、内径 7.5 mm には 0.2 mL/
min 、内径 4.6 mm には 0.1 mL/min を使用しま
す ( 図 3 を参照してください )。
有機溶媒系
有機溶媒系 GPC カラムは、極性がパーフルオロ
アルカンからジメチルホルムアミドまでの広い
範囲の有機溶媒で使用できます。水 / 有機溶媒
混合系も使用できますが、水を使用する場合、
水混和性有機溶離液中の水の濃度を 10 容量 %
未満にする必要があります。特に指定のない限
り、PLgel カラムは、エチルベンゼン中に保存
された状態で提供されます。0.5 mL/min でフ
ラッシュして、エチルベンゼンから THF に直接
置き換えることができます。PL Multisolvent カ
ラムは、安定化した THF 中に保存された状態で
提供されます。有機溶媒に直接置き換えること
も、また純水に置き換えた後にバッファに置き
換えることもできます。ゲル上の過酸化物の攻
撃を受けるため、安定化されていない THF ( た
とえば、HPLC グレード ) は溶離液として推奨し
ません。
水系と極性
水系 / 極性 GPC カラムは通常、0.02% アジ化ナ
トリウム水溶液で保存された状態で提供され、
エンドキャップで完全に密閉されています。カ
ラムをシステムに接続していないときには、エ
ンドキャップを定位置に取り付けておく必要が
あります。pH 範囲２～ 10 ( 高および低イオン
強度 ) 内の溶離液緩衝系は、カラムへの悪影響
なく使用することができます。ある溶離液から
別の溶離液に置き換える場合、塩または添加剤
の互換性と溶解度を確認して、カラムに不可逆
的な損傷を与えるオンカラム沈殿を防ぐ必要が
あります。PolarGel カラムは、広範囲の有機溶
媒、および水性溶離液で使用できます。成分が
完全に混和する場合、有機溶媒混合系を使用で
きます。PL アクアゲル -OH および PL Rapide
Aqua カラムに対する推奨有機溶媒は、メタノー
ルのみです ( 最大 50 容量 %)。
PL Multisolvent
PL Multisolvent カラムは、安定化した THF 中に
保存された状態で提供されます。有機溶媒に直
接置き換えることも、また純水に置き換えた後
にバッファに置き換えることもできます。ゲル
上の過酸化物の攻撃を受けるため、安定化され
ていない THF ( たとえば、HPLC グレード ) は溶
離液として推奨しません。pH 範囲 2 ～ 8.5 ( 高
および低イオン強度 ) 内の溶離液緩衝系は使用
することができます。ある溶離液から別の溶離
液に置き換える場合、塩または添加剤の互換性
と溶解度を確認して、カラムに不可逆的な損傷
を与えるオンカラム沈殿を防ぐ必要がありま
す。DMF、DMSO、DMAc などの極性有機溶媒
は溶離液として推奨しません。

12
有機溶媒系カラム (PLgel、PlusPore、PL Rapide)
カラムはエチルベンゼン中に保存された状態で提供されます
低粘性溶媒への置
き換え例
THF
クロロホルムジク
ロロメタン
中粘性溶媒への置
き換え例
トルエン
DMF
DMSO, HFIP
高粘性溶媒への置
き換え例
TCB
m- クレゾール
NMP
カラムをアセトン
で、0.5 mL/min
で 2 カラム容量分
フラッシュ
カラムをアセトン
で、0.5 mL/min
で 2 カラム容量分
フラッシュ
カラムオーブンを
50 ℃、流量を 0.1
mL/min に設定
新しい溶離液で、
0.5 mL/min で 2
カラム容量分フ
ラッシュ
新しい溶離液で、
0.2 mL/min で 2
カラム容量分フ
ラッシュ
カラムを新しい溶
離液で、**50 ℃、
0.1 mL/min で 2
カラム容量分直接
フラッシュ
カラム温度を 30
～ 40 ℃ * ( 分析で
要求される温度 )
に 1 ℃ / 分で昇温
カラム温度を 50
～ 80 ℃ * ( 分析で
要求される温度 )
に 1 ℃ / 分で昇温
カラム温度を 100
～ 220 ℃ * ( 分析
で要求される温
度 ) に 1 ℃ / 分で
昇温
カラムを新しい溶
離液中で必要な流
速で操作
カラムを新しい溶
離液中で必要な流
速で操作
カラムを新しい溶
離液中で必要な流
速で操作
* 使用温度は、常に溶媒の沸点より 10 ℃以上低い温度に保ちま
す。** 混和性を保ちます。自信のない場合、アセトンを室温で
使用します。
水系および極性カラム (PolarGel、PL aquagel-OH、
PL Rapide Aqua)
カラムは 0.02% NaN3 を含む水中に保存された状態で提供され
ます
水性溶媒への置き
換え例
水
バッファ
極性有機溶媒 **
への置き換え例
DMSO
DMF
溶媒混合系への
置き換え例
水 /THF*
水 / メタノール *
カラムを純水で、
1.0 mL/min で 2
カラム容量分フ
ラッシュ
カラムを純水で、
1.0 mL/min で 2
カラム容量分フ
ラッシュ
カラムを純水で、
1.0 mL/min で 2
カラム容量分フ
ラッシュ
新しいバッファ
で、1.0 mL/min
で 2 カラム容量分
フラッシュ
アセトンで、0.5
mL/min で 2 カラ
ム容量分フラッ
シュ
新しい事前混合溶
離液で、0.2 mL/
min で 2 カラム容
量分フラッシュ
カラム温度 * を
( 分析で要求され
る温度まで ) 1 ℃ /
分で昇温
新しい溶離液で、
0.2 mL/min で 2
カラム容量分フ
ラッシュ
カラム温度 * を
( 分析で要求され
る温度まで ) 1 ℃ /
分で昇温
カラムを新しい溶
離液中で必要な流
速で操作
カラム温度を 50
～ 80 ℃ * ( 分析で
要求される温度 )
に 1 ℃ / 分で昇温
カラムを新しい溶
離液中で必要な流
速で操作
カラムを新しい溶
離液中で必要な流
速で操作
* 使用温度は、常に溶媒の沸点より 10 ℃以上低い温度に保ちま
す。** Polargel のみ
多溶媒カラム (PL Multisolvent)
カラムは 0.015% BHT を含む THF に保存された状態で提供さ
れます
水性溶媒への置き換え例
水
バッファ
有機溶媒への置き換え例
クロロホルム *
ジクロロメタン *
カラムを純水で、 1.0 mL/min
で 2 カラム容量分フラッシュ
新しい溶離液で、0.5 mL/
min で 2 カラム容量分フ
ラッシュ
新しいバッファで、1.0 mL/
min で 2 カラム容量分フラッ
シュ
カラム温度を ( 分析で要求
される温度まで ) 1 ℃ / 分で
昇温
カラム温度を ( 分析で要求され
る温度まで ) 1 ℃ / 分で昇温
カラムを新しい溶離液中で必要
な流速で操作
カラムを新しい溶離液中で
必要な流速で操作
* 有機溶媒は最大 50% です。** 使用温度は、常に溶媒の沸点よ
り 10 ℃以上低い温度に保ちます。
図 3. 溶離液置き換えガイド
日本語版

13
日本語版
カラムのテストと仕様
すべてのカラムに、テスト条件とカラムパ
フォーマンスを記載したテスト証明書が添付さ
れています。以下では、カラムパフォーマンス
の測定結果について説明します。
N = 5.54 [ ]
t
W1/2
2
N = 25 t
W5δ
効率 (1/2 高さ) (理論段数/m)
効率 (5δ) (理論段数/m)
対称 a/b
“t” はピーク溶出時間、“W1/2 “ は 1/2 ピーク高
さにおけるピーク幅、“W5 σ” はピーク高さの
4.4% におけるピーク幅、“L” はカラム長さ ( メー
トル単位 )、“a” と “b” はピーク高さの 10% で測
定される垂線の両側のピーク幅です。
カラム効率は、多数の実験的要因 ( システムの
デッドボリューム、溶離液、流速、テスト試薬、
温度など ) に依存します。これらのパラメータ
の変動性により、テスト結果は、カラム証明書
に記載されたものと異なる可能性があります。
バンドの広がりの影響は、高速高分離またはナ
ローボア GPC/SEC カラムを使用する場合によ
り重大です。Agilent カラムの潜在能力を最大限
に引き出すには、システムにおける拡散を最小
限に抑えることが重要です。
パフォーマンスは、カラムセットの初回使用時
に測定後、定期的に測定することを推奨します。
カラムの効率が初期値の 80% 未満になったら、
カラムの交換を検討してください。
[ ]
/L
2
/L

14
表 3. カラム仕様
日本語版
カラム 代表動作
圧力 psi
(bar)1
最大動作圧
力 psi (bar)
最大使用
温度℃ 2
PLgel 3 µm 750 (50) 2,700 (180) 110
PLgel 5 µm 450 (30) 2,200 (150) 150
PLgel 9 & 10 µm 150 (10) 2,200 (150) 220
PLgel 20 µm 50 (3) 2,200 (150) 220
PLgel Olexis 90 (6) 2,250 (150) 220
PLgel Prep 10 µm 350 (25) 2,200 (150) 150
PolyPore 450 (30) 2,200 (150) 160
ResiPore 750 (50) 2,700 (180) 120
MesoPore 750 (50) 2,700 (180) 120
OligoPore 450 (30) 1,500 (100) 120
PL Rapide-F 350 (25) 1,500 (100) 150
PL Rapide-L 225 (15) 1,100 (75) 150
PL Rapide-M 75 (5) 1,100 (75) 220
PL Rapide-H 75 (5) 1,100 (75) 220
PolarGel 450 (30) 1,600 (112) 80
PL aquagel-OH 5 µm 900 (60) 1,600 (112) 90
PL aquagel-OH 8 µm 450 (30) 1,600 (112) 90
PL aquagel-OH 15 µm 150 (10) 1,600 (112) 90
PL Rapide Aqua 225 (15) 1,600 (112) 90
PL Multisolvent (水)1450 (100) 1,600 (112) 80
PL Multisolvent
(溶媒)
750 (50) 1,600 (112) 80
1THF (有機溶媒系カラム) または H20 (水系カラム)、20 ℃、内
径 4.6 mm で 0.3 mL/min、内径 7.5 mm で 1.0 mL/min、内径 10
mm で 1.8 mL/ min (PL Rapide 10 x 100 mm の場合 2 mL/min、
25 x 300 mm で 10 mL/min の条件に基づいた結果です。
2非常に高い温度では、カラム寿命が短くなる可能性がありま
す。OligoPore と PL Rapide-F では 80 ℃を超えると寿命に対する
悪影響が現れる可能性があります。また、PL Multisolvent では
50 ℃を超えると劣化することがあります。このため、状況に応
じて流速と温度を修正します。

15
日本語版
保管
システムからカラムを取り外したらすぐに、蒸
発によるカラムの乾燥を防ぐため、エンドプラ
グを元の位置に戻します。戻さないと、ゲルの
収縮や充填剤の崩壊が発生することがありま
す。エンドプラグは、指で締めます。これまで
に説明した溶離液はすべて、保管に適していま
すが、安定化されていない THF とハロゲン化溶
剤は使用しないでください。
水系カラムを長期間保管する場合、水でフラッ
シュし、0.02% アジ化ナトリウム水溶液で保管
します。
保証
カラムには、出荷日から 90 日間の保証が付い
ています。カラムを 170 ℃以上で使用する場合、
保証期間は 30 日に短縮されます。アジレント・
テクノロジーは、不適切な処理および最大使用
温度と圧力 ( 表 3 を参照 ) を超えたカラムの使
用の結果生じた損害に対して責任を負わないも
のとし、保証は無効となります。保証の全文に
ついては、アジレントの一般販売条件をご請求
ください。
メンテナンス
充填ベッドの損傷や、カラムフリットの目詰ま
りの結果、カラムパフォーマンスが低下する可
能性があります。フリットの目詰まりの場合、
カラムを推奨流速で 1 分間逆方向にフラッシュ
すると、ゆるく結合している残存物質を除去
できます。バックフラッシュを行ってもカラム
の目詰まりが存在する場合、カラムインレット
フリットを以下の手順で交換することができま
す。

16
フリット交換手順
1. カラムの出口端のエンドフィッティングを
密封します。注入口端の最上部でカラムをクラ
ンプで垂直に固定します。カラムの注入口端の
エンドフィッティングをゆるめて、静かに取り
外します ( 水系カラムの場合、この手順の前に、
フラッシュにより溶離液を水に置き換えます )。
2. エンドフィッティングからゲルを除去した
後、フリット、シール、スプレッダをフリット
除去ツールで取り外し、エンドフィッティング
からゲルのすべての痕跡を洗い流します。次に
新しいフリット、シール、スプレッダをエンド
フィッティングの底に置き、正しく装着されて
いることを確認します。
3. 一部のゲル (2 mm まで ) がカラムからはみ出
している可能性があります。スパチュラを使用
して、カラムの一番上にリペアゲルをドーム形
にのせ、充分な量の溶媒を加えて、ゲル粒子同
士を結合させます。
4. カラムを 45 ° の角度で下を向けて持ち、フ
リット、シール、スプレッダをすべて装着し
たエンドフィッティングを戻します。エンド
フィッティングを 1 フラット通り越して手で締
めます。
5. カラムを 0.5 mL/min で溶離液でバックフ
ラッシュし、閉じ込められた空気を除去します。
フリットが正しく装着されていない場合、溶離
液中にゲル粒子がないか確認します。カラムを
通常フロー条件に戻し、圧力降下とカラム効率
を確認します。
アジレントでは、分取カラムをアジレントに戻
して、交換フリットまたはリペアの取り付けを
確認してもらうことを推奨しますが、必要に応
じて、上記と同様の手順を適用できます。さら
にテクニカルサポートが必要な場合、またはカ
ラム修理サービスを利用する場合は、アジレン
ト ・ テクノロジーにお問い合わせください。
日本語版

17
中文
安装
管路和接头
对于分析柱,建议使用外径为 1/16 英寸、内径为
0.12 mm 或 0.17 mm 的不锈钢管路进行连接，对
于 25 mm 的制备柱则使用内径为 0.5 mm 的管
路。应尽量缩短色谱柱、检测器之间的管路长度，并
减小进样量，以避免因死体积过大而导致系统性能
下降。应使用 Parker 兼容的 1/16 英寸螺帽和密封
垫圈进行色谱柱连接。图 1 介绍了色谱柱接头的兼
容性。
图 1. 兼容的接头
标准色谱柱端接头的距离“X”是 0.090 英寸，需要长度
至少为 0.210 英寸的外螺纹螺帽。其他制造商提供的某
些接头可能不兼容，例如 Waters 和 Rheodyne。如果不
确定，请联系安捷伦科技公司。
色谱柱连接
按照标注的洗脱液流向连接 GPC 色谱柱，并用扳
手夹住 1/16 英寸螺帽和实际的端接头，将螺帽和
密封垫圈拧紧。
建议在将色谱柱出口连接到其他色谱柱或检测器
之前先泵出几滴洗脱液，以清除出口接头中可能
存在的任何颗粒物。
为了避免两端接头变松导致漏液，必须在靠近 连
接螺帽的端接头上使用扳手，而不是在色 谱柱管
凹槽平面或另一端的连接头位置上使用 扳手，见
图 2。
图 2. 不要在柱管凹槽平面上使用扳手

18
洗脱液流速
传统 GPC 色谱柱使用内径为 7.5 和 7.8 mm 的色谱
柱，大多数分离使用的最佳流速为 1.0 mL/min。当
色谱柱内径增加或减少时，应对体积流速做出相应
调整，以使通过色谱柱时具有相同的线速度。
建议流速如表 1 所示，但是，为了避免过高的压
力，较高粘度的洗脱液应在较低的流速和较高洗
脱温度下使用。应逐渐改变流速并限制压力脉冲。
在任何时候都不应超过色谱柱的最大操作压力
（见表 4）。
表 1. 建议流速
色谱柱 典型流速 (mL/min) 建议流速 (mL/min)
2.1 mm 内径 0.04-0.1 0.06
4.6 mm 内径 0.2-0.5 0.3
7.5 与 7.8
mm 内径
0.5-1.5 1.0
10 mm 内径 2.0-5.0 2.0
25 mm 内径 5.0-20.0 10.0
样品前处理和进样
如果要达到最大分离度和预期的色谱柱寿命，进
行样品前处理时需要格外注意。
为了避免色谱柱滤芯堵塞，建议进行样品过滤（根
据分子量选择 0.5-2.0 µm 的孔隙率）。保护柱将
进一步保护色谱柱，而几乎不对色谱柱性能产生
不利影响。
根据样品的分子量，为每种类型的分析确定最佳
样品体积和浓度。较宽分布的聚合物通常以高于
低多分散度样品的浓度进样。过载不会损坏色谱
柱，但会使峰发生变形，从而获得虚假结果。
过大的进样器定量环体积可能导致谱带展宽并降
低系统性能，对高效或窄径色谱柱尤其如此。安捷
伦进样量建议如表 2 所示。
表 2. 进样量建议
色谱柱 建议浓度 (%) 每根色谱柱的建议
进样量 (µL)
2.1 mm 内径 0.01-0.2 0.2-2
4.6 mm 内径 0.01-0.2 1-20*
7.5 与 7.8 mm
内径
0.05-0.5 20-50**
10 mm 内径 0.05-0.5 20
25 mm 内径 0.5-5.0 500-2000
* PL 多溶剂色谱柱、MesoPore 和 ResiPore 为 1-10 µL。 ** PL 多溶剂
色谱柱、MesoPore 和 ResiPore 为 10-20 µL，PL Rapide/PL Rapide
Aqua 为 20 µL
中文

19
中文
洗脱液
所有洗脱液必须是高纯的，在使用之前应当过滤
和脱气。
GPC 色谱柱可切换到其他洗脱液。在切换到其他
洗脱液时，应重点考虑新洗脱液的兼容性和粘度。
图 3 列出了7.5 mm 内径色谱柱的流动相切换方
法。对于其他内径的色谱柱，可参考使用表 1 列出
的流速。
如果使用高粘度洗脱液（如 TCB、NMP、DMF），在
加热或冷却的色谱柱时，应始终保持较低的流速。
通常，在升温之前，7.5 mm 内径色谱柱使用的流
速是 0.2 mL/min，4.6 mm 内径色谱柱使用的流
速是 0.1 mL/min，见图 3。
有机柱
有机 GPC 色谱柱与极性介于全氟烷烃到二甲基
甲酰胺之间的各种有机溶剂兼容。混合有机溶剂
系统也可以使用，但不应使用水，除非水在互溶
的有机洗脱液中体积浓度小于 10%。除非另行说
明，色谱柱在出厂时通常保存在乙苯中，可以使用
0.5 mL/min 的流速将色谱柱从乙苯直接过渡到
THF 中。不建议使用不稳定的 THF（如 HPLC 级）
作为洗脱液，因为过氧化物会侵蚀凝胶。
水性和极性柱
水性/极性 GPC 色谱柱出厂时通常保存在含有
0.02% 叠氮化钠的水溶液中，在未将色谱柱连接到
系统时，应使用堵头将其完全密封。可以使用 pH
2-10（高或低离子强度）范围的缓冲液系统，不会对
色谱柱带来不利影响。在从一种洗脱液切换到另一
种洗脱液时，必须检查任何盐或添加剂的兼容性和
溶解度，以避免在色谱柱上析出，从而对色谱柱造
成无法挽回的损 坏。PolarGel 色谱柱能与各种有机
溶剂及水溶液洗脱液相兼容。如果组分可以完全混
合的话， 可以使用混合有机溶剂。对于 PL aquagel-
OH 和 PL Rapide Aqua 色谱柱，唯一建议使用的有
机溶剂是甲醇（最大为其体积的 50%）。
PL 多溶剂色谱柱
PL 多溶剂色谱柱保存在经稳定的 THF 中，可直接
切换为有机溶剂，也可依次切换为纯水和缓冲溶
液。不建议使用未经稳定的 THF（例如 HPLC 级）
作为洗脱液，因为它会受到凝胶上过氧化物的影
响。可以使用 pH 范围为 2-8.5（高和低离子强度）
的缓冲洗脱液。在从一种洗脱液切换为另一种洗
脱液时，必须检查所有盐或添加剂的兼容性和溶
解度，以防产生会对色谱柱造成不可逆损坏的柱
内沉淀。不建议使用 DMF、DMSO 或 DMAc 等极
性有机溶剂作为洗脱液。

20
有机色谱柱（PLgel；PlusPore；PL Rapide）
在乙苯中保存的色谱柱
切换到低粘度溶剂
例如
THF 氯仿 二氯甲
切换到中粘度溶剂
例如
甲苯 DMF DMSO,
HFIP
切换到高粘度溶剂
例如
TCB 间甲酚 NMP
使用丙酮冲洗色谱
柱，流速为0.5 mL/
min，冲洗 2 个色谱
柱体积
使用丙酮冲洗色谱
柱，流速为0.5 mL/
min，冲洗 2 个色谱
柱体积
将柱温箱设置为 50
°C，流速为 0.1 mL/
min
使用新洗脱液冲洗，流
速为 0.5 mL/min，冲
洗 2 个色谱柱体积
使用新洗脱液冲洗，
流速为 0.2 mL/min，
冲洗 2 个色谱柱体积
使用新洗脱液直接
冲洗色谱柱** 温
度 为 50 °C，流速为
0.1 mL/min，冲洗 2
个色谱柱体积
根据分析需要将
色 谱柱温度提高至
30-40 °C*，增量为1
°C/min
根据分析需要将
色 谱柱温度提高至
50-80 °C*，增量为1
°C/min
根据分析需要将
色 谱柱温度提高至
100-220 °C*，增量
为 1 °C/min
在新洗脱液中以所
需流速操作色谱柱
在新洗脱液中以所
需流速操作色谱柱
在新洗脱液中以所
需流速操作色谱柱
* 始终确保操作温度为低于溶剂沸点至少 10 °C。 ** 始终确保可混
合性。如果不确定，请在室温条件下使用丙酮。
水性与极性色谱柱（PolarGel、PL aquagel-OH、
PL Rapide Aqua）
在含有 0.02% NaN 的水中保存色谱柱3
切换到水性溶剂，
例如
水
缓冲液
切换到极性有机溶
剂**，例如
DMSO
DMF
切换到混合溶剂系
统 ，例 如
水/THF*
水/甲醇*
使用纯水冲洗色谱
柱，流速为 1.0 mL/
min，冲洗 2 个色谱
柱体积
使用纯水冲洗色谱
柱，流速为 1.0 mL/
min，冲洗 2 个色谱
柱体积
使用纯水冲洗色谱
柱，流速为 1.0 mL/
min，冲洗 2 个色谱
柱体积
使用新缓冲液冲洗，
流速为 1.0 mL/min，
冲洗 2 个色谱柱体积
使用丙酮冲洗，流
速为 0.5 mL/min，
冲洗 2 个色谱柱
体积
使用新的预混合洗
脱液冲洗，流速为
0.2 mL/min，冲洗2
个色谱柱体积
在新洗脱液中使
用 所需流速操作色
谱柱，最高温度为
50 °C
使用新洗脱液冲洗，
流速为 0.2 mL/min，
冲洗 2 个色谱柱体积
根据分析需要提高
色谱柱温度 * ，增 量
为 1 °C/分钟
在新洗脱液中以所
需流速操作色谱柱
根据分析需要将色
谱柱温度提高至
50-80 °C*，增量为 1
°C/min
在新洗脱液中以所
需流速操作色谱柱
在新洗脱液中以所
需流速操作色谱柱
* 始终确保操作温度至少比溶剂沸点低 10 °C
多溶剂色谱柱（PL 多溶剂色谱柱）
色谱柱保存在含 0.015% BHT 的 THF 中
切换到水性溶剂，例如
水, 缓冲液
切换到混合溶剂系统，例如
水/甲醇*
使用 2 倍色谱柱体积的纯水以
1.0 mL/min 的流速冲洗色谱柱
使用 2 倍色谱柱体积的新洗
脱液以 0.5 mL/min 的流速
冲洗色谱柱
使用 2 倍色谱柱体积的新缓冲
液以 1.0 mL/min 的流速冲洗
色谱柱
根据分析需求以 1 °C/min 的
速率升高柱温
根据分析需求以 1 °C/min 的速
率升高柱温
使用新洗脱液以所需的流速
流过色谱柱
使用新洗脱液以所需的流速流
过色谱柱
*最大 50% 有机溶剂。
** 始终确保操作温度至少比溶剂沸点低 10 °C
图 3 洗脱液切换指南
中文