Siemens Immulite Homocysteine 2000 User manual

Siemens Medical Solutions Diagnostics
Homocysteine

IMMULITE®2000 Homocysteine
2 IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20)
English
Intended Use: For in vitro diagnostic use
with the IMMULITE 2000 Analyzer — for
the quantitative determination of
L-homocysteine in human plasma or
serum. This device can assist in the
diagnosis and treatment of patients
suspected of having
hyperhomocysteinemia or homocystinuria.
Catalog Number: L2KHO2 (200 tests)
Test Code: HCY Color: Dark Gray
Warning: Specimens from patients
who are on drug therapy involving
S-adenosyl-methionine may show
falsely elevated levels of
homocysteine.
Results on specimens obtained from
patients taking methotrexate,
carbamazepine, phenytoin, nitrous
oxide, anti-convulsants, or
6-azauridine triacetate should be
interpreted with caution as these
substances interfere with
homocysteine determination.
Summary and Explanation
Total homocysteine (tHcy) has emerged
as an important risk factor in the
assessment of cardiovascular disease.3-
7,12 Hcy, a thiol-containing amino acid, is
produced by the intracellular
demethylation of methionine. Hcy thereby
serves as a pool that can be later
scavenged for use in the remanufacture of
either methionine through the action of the
folate-dependent enzyme methionine
synthase or cysteine using the B6
dependent transsulphuration pathway.1,2
Hcy in plasma is found primarily in a
protein bound form but free, oxidized and
disulfide forms are also present.
Highly elevated levels of tHcy are found in
patients with homocystinuria, a rare
genetic disorder of the enzymes involved
in Hcy metabolism.1,2,3 Homocystinuria
patients exhibit arterial thromboembolism,
mental retardation and early
arteriosclerosis.1Less severe genetic
defects are also associated with moderate
levels of Hcy.3,4,5
Homocysteine has been identified as a
indicator of cardiovascular disease. A
meta-analysis of 27 epidemiological
studies has suggested that a 5 µmol/L
increase in tHcy could be associated with
an odds ratio for coronary artery disease
(CAD) of 1.6 for men and 1.8 for women,
the same increase in risk as a 0.5 mmol/L
increase in cholesterol.7In addition,
patients with chronic renal disease
complicated by arteriosclerotic
cardiovascular disease show elevated
tHcy due to the inability of the kidney to
remove Hcy from the blood.1,2,3
Principle of the Procedure
Competitive Immunoassay.
The IMMULITE 2000 performs an on-line
one-cycle sample pretreatment of patient
plasma or serum with S-adenosyl-L-
homocysteine (SAH) hydrolase and
dithiothreitol (DTT) solution in a reaction
tube containing no bead. After a 30-minute
incubation, the treated sample is
transferred to a second reaction tube
containing a SAH-coated polystyrene bead
and an alkaline phosphatase-labeled
antibody specific for SAH. During a 30-
minute incubation, the converted SAH from
the sample pretreatment competes with
immobilized SAH for binding alkaline
phosphatase-labeled anti-SAH antibody.
Unbound enzyme conjugate is removed by
centrifugal wash. Substrate is added and
the procedure continues as described for
typical immunoassays in the Operator's
Manual.
Incubation Cycles: 2 × 30 minutes. 2 test
positions per assay: 1 sample treatment
cup; 1 immunoreaction cup.
Cycle 1: Release of bound homocysteine
and conversion to SAH.
Cycle 2: Immunoreaction.
Specimen Collection
Heparinized and EDTA plasma are the
samples of choice, but serum is also
suitable for use. It is important to separate
the plasma or serum from the cells as
soon as possible after collection, as

IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20) 3
synthesis of HCY will take place in red
blood cells after sampling. Samples
should be stored on ice between the
time of sampling and centrifugation.
Note that storage on ice makes the use of
serum samples particularly difficult.
The use of an ultracentrifuge is
recommended to clear lipemic samples.
Hemolyzed samples may indicate
mistreatment of a specimen before receipt
by the laboratory; hence the results should
be interpreted with caution.
Centrifuging serum samples before a
complete clot forms may result in the
presence of fibrin. To prevent erroneous
results due to the presence of fibrin,
ensure that complete clot formation has
taken place prior to centrifugation of
samples. Some samples, particularly
those from patients receiving
anticoagulant therapy, may require
increased clotting time.
Blood collection tubes from different
manufacturers may yield differing values,
depending on materials and additives,
including gel or physical barriers, clot
activators and/or anticoagulants.
IMMULITE 2000 Homocysteine has not
been tested with all possible variations of
tube types. Consult the section on
Alternate Sample Types for details on
tubes that have been tested.
Volume Required: 15 µL plasma or
serum.
Storage: 14 days at 2–8°C, or 6 months
at –20°C.
Warnings and Precautions
For in vitro diagnostic use.
Reagents: Store at 2–8°C. Dispose of in
accordance with applicable laws.
Follow universal precautions, and handle
all components as if capable of
transmitting infectious agents. Source
materials derived from human blood were
tested and found nonreactive for syphilis;
for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis
B surface antigen; and for antibodies to
hepatitis C.
Sodium azide, at concentrations less than
0.1 g/dL, has been added as a
preservative. On disposal, flush with large
volumes of water to prevent the buildup of
potentially explosive metal azides in lead
and copper plumbing.
Chemiluminescent Substrate: Avoid
contamination and exposure to direct
sunlight. (See insert.)
Water: Use distilled or deionized water.
Materials Supplied
Components are a matched set. Labels on
the inside box are needed for the assay.
Homocysteine Bead Pack (L2HO12)
With barcode. 200 beads, coated with
S-adenosyl-L-homocysteine (SAH). Stable
at 2–8°C until the expiration date.
L2KHO2: 1 pack.
Homocysteine Reagent Wedge
(L2HOA2)
With barcode. One wedge, containing 3
reagents: 15.5 mL bovine S-adenosyl-L-
homocysteine hydrolase in buffer, with
preservative. 18.5 mL dithiothreitol (DTT)
in buffer. 11.5 mL alkaline phosphatase
(bovine calf intestine) conjugated to
murine monoclonal anti-SAH in buffer.
Stable at 2–8°C until expiration date.
L2KHO2: 1 wedge.
Before use, tear off the top of the label at
the perforations, without damaging the
barcode. Remove the foil seal from the top
of wedge; snap the sliding cover down into
the ramps on the reagent lid.
Homocysteine Adjustors (LHOL, LHOH)
Two amber vials (Low and High), 2.0 mL
each, of synthetically-derived S-adenosyl-
L-homocysteine (SAH) in a protein/buffer
matrix. Stable at 2–8°C for 30 days after
opening, or for 6 months (aliquotted) at
–20°C.
L2KHO2: 1 set.
Before making an adjustment, place the
appropriate Aliquot Labels (supplied with
the kit) on test tubes so that the barcodes
can be read by the on-board reader.
Kit Components Supplied
Separately
Homocysteine Sample Diluent (L2HOZ)
For the on-board dilution of high samples.
25 mL of concentrated (ready-to-use)
homocysteine-free protein/buffer matrix.

4 IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20)
Storage: 30 days (after opening) at 2–8°C
or 6 months (aliquotted) at –20°C.
Barcode labels are provided for use with
the diluent. Before use, place an
appropriate label on a 16 × 100 mm test
tube, so that the barcodes can be read by
the on-board reader.
L2HOZ: 3 labels
L2SUBM: Chemiluminescent Substrate
L2PWSM: Probe Wash
L2KPM: Probe Cleaning Kit
LRXT: Reaction Tubes (disposable)
L2ZT: 250 Sample Diluent Test Tubes
(16 × 100 mm)
L2ZC: 250 Sample Diluent Tube Caps
CCCM: A bi-level, nonhuman serum-
based Cardiac Marker Control Module,
containing homocysteine as one of four
different constituents.
Also required
Distilled or deionized water; test tubes;
controls.
Assay Procedure
Note that for optimal performance, it is
important to perform all routine
maintenance procedures as defined in the
IMMULITE 2000 Operator's Manual.
See the IMMULITE 2000 Operator's
Manual for: preparation, setup, dilutions,
adjustment, assay and quality control
procedures.
Recommended Adjustment Interval:
4 weeks.
Quality Control Samples: Use controls
or plasma or serum pools with at least two
levels (low and high) of homocysteine.
Expected Values
Homocysteine levels can vary with age,
gender, geographical area and genetic
factors, therefore it is important for
laboratories to establish their own
reference ranges based on their local
populations. Literature suggests a
reference range of 5 – 15 µmol/L for adult
males and females,11 but also notes that
men tend to have higher levels than
women, and that postmenopausal women
tend to have higher levels than
premenopausal.12
One hundred and twenty samples from
apparently healthy adult male and female
volunteers age 22–66 were analyzed
using the IMMULITE 2000 Homocysteine
procedure. The samples were drawn in
heparinized plasma tubes and kept on ice
prior to separation of the plasma from the
cells. The median value was 7.7 µmol/L,
with a central 95% range of
5.0 – 12 µmol/L.
Consider these limits as guidelines only.
Each laboratory should establish its own
reference ranges.
Limitations
Specimens from patients who are on drug
therapy involving S-adenosyl-methionine
may show falsely elevated levels of
homocysteine.
Although analysis of the parent
compounds of carbamazepine, phenytoin,
6-azauridine, and anthopterin indicate no
cross-reactivity, specimens obtained from
patients treated with these drugs, as well
as with methotrexate, nitrous oxide, and
other anticonvulsants, should be
interpreted with caution as these
substances have been shown to interfere
in some homocysteine assays.
Heterophilic antibodies in human serum
can react with the immunoglobulins
included in the assay components causing
interference with in vitro immunoassays.
[See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic
antibodies: a problem for all
immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-
33.] Samples from patients routinely
exposed to animals or animal serum
products can demonstrate this type of
interference potentially causing an
anomalous result. These reagents have
been formulated to minimize the risk of
interference; however, potential
interactions between rare sera and test
components can occur. For diagnostic
purposes, the results obtained from this
assay should always be used in
combination with the clinical examination,
patient medical history, and other findings.
Performance Data
See Tables and Graphs for data
representative of the assay's performance.
Results are expressed in µmol/L. (Unless
otherwise noted, all were generated on
heparinized plasma samples.)
Calibration Range: 2 to 50 µmol/L.

IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20) 5
The assay is traceable to an internal
standard manufactured using qualified
materials and measurement procedures.
Analytical Sensitivity: 0.5 µmol/L
Precision: Samples were repeatedly
assayed in quadruplicate over the course
of several days, for a total of 20 runs and
80 replicates. (See "Precision" table.)
Linearity: Samples were assayed under
various dilutions. (See "Linearity" table for
representative data.)
Recovery: Samples spiked 1 to 19 with
three homocysteine solutions (125, 250,
500 µmol/L), were assayed. (See
"Recovery" table for representative data.)
Specificity: The antibody is highly specific
for homocysteine. (See "Specificity" table.)
Bilirubin: Presence of conjugated and
unconjugated bilirubin in concentrations
up to 200 mg/L has no effect on results,
within the precision of the assay.
Hemolysis: Presence of hemoglobin in
concentrations up to 512 mg/dL has no
effect on results, within the precision of the
assay.
Lipemia: Presence of triglycerides in
concentrations up to 3,000 mg/dL has no
effect on results, within the precision of the
assay.
Alternate Sample Type: To determine
whether serum can be used in the
IMMULITE 2000 Homocysteine
procedure, blood was collected on ice
from 34 laboratory volunteers into
heparinized, EDTA and plain vacutainer
tubes. Samples were separated from the
cells, and matched samples were spiked
with homocysteine and then assayed by
the IMMULITE 2000 Homocysteine
procedure, with the following results.
(EDTA) = 0.98 (Heparin) + 0.85 µmol/L
r = 0.954
(Serum) = 1.02 (Heparin) – 0.53 µmol/L
r = 0.975
Means:
20.2 µmol/L (Heparin)
20.7 µmol/L (EDTA)
20.1 µmol/L (Serum)
To assess the effect of storage
temperature, heparinized, EDTA and plain
vacutainer tubes were collected from five
volunteers for each tube type. Some tubes
were stored at room temperature, while
other tubes were kept on ice for various
time periods prior to separation. The
graphs below show the effect of storage
time and temperature for heparin, EDTA
and serum. (See graphs 1-3).
Method Comparison 1: The assay was
compared to a commercially available
manual enzyme immunoassay (Kit A) on
168 plasma samples (Concentration
range: approximately 4 to 43 µmol/L. See
“Method Comparison 1” graph.) By linear
regression:
(IML 2000) = 1.0 (Kit A) + 0.24 µmol/L
r = 0.966
Means:
12.9 µmol/L (IMMULITE 2000)
12.7 µmol/L (Kit A)
Method Comparison 2: The assay was
also compared to an in-house HPLC
method in use at a reference laboratory in
the United States on 95 heparinized
plasma samples (Concentration range:
approximately 4 to 44 µmol/L. See
“Method Comparison 2” graph.) By linear
regression:
(IML 2000) = 0.97 (HPLC) + 0.71 µmol/L
r = 0.974
Means:
13.4 µmol/L (IMMULITE 2000)
13.2 µmol/L (HPLC)
Method Comparison 3: The assay was
compared to another commercially
available immunoassay (Kit B) on 113
plasma samples (Concentration range:
approximately 4 to 23 µmol/L. See
“Method Comparison 3” graph.) By linear
regression:
(IML 2000) = 0.90 (Kit B) – 0.02 µmol/L
r = 0.925
Means:
8.7 µmol/L (IMMULITE 2000)
9.6 µmol/L (Kit B)
References
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homocysteinemia: interruption of the coordinate
regulation by s-adenosylmethionine of the
remethylation and transsulfuration of
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6 IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20)
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stage renal disease (ESDR): Prevalence,
etiology and potential relationship to arterio-
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homocysteine in plasma or serum: Methods and
clinical applications. Clin Chem 1993;39:1764-
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Homocysteine as a risk factor for
atherosclerosis: A Review. Cardiovasc Pathol
1997;6:1-9.
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Fax: [phone]. Outside the United
States, contact your National Distributor.
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ISO 13485:2003.
Tables and Graphs
Precision (µmol/L)
Within-Run1Total2
Mean3SD4CV5SD CV
1 3.94 0.29 7.4% 0.41 10.4%
2 9.88 0.47 4.8% 0.75 7.6%
3 11.1 0.38 3.4% 0.46 4.1%
4 25.9 1.06 4.1% 1.31 5.1%
Specificity (µmol/L)
Compound1
Amount
Added2
µmol/L % Cross
reactivity3
Adenosine 5000 ND
S-adenosyl-L-methionine 500 0.6%
Cystathionine 500 6.1%
L-Cysteine 100000 ND
Glutathione 100000 ND
ND: Not detectable.4
Linearity (µmol/L)
Dilution1Observed2Expected3%O/E4
1 8 in 8519.2 — —
4 in 8 9.47 9.60 99%
2 in 8 4.94 4.80 103%
1 in 8 2.11 2.40 88%
2 8 in 8 25.2 — —
4 in 8 13.8 12.6 110%
2 in 8 6.15 6.30 98%
1 in 8 3.34 3.15 106%
3 8 in 8 31.6 — —
4 in 8 15.7 15.8 99%
2 in 8 7.44 7.90 94%
1 in 8 3.37 3.95 85%
4 8 in 8 47.5 — —
4 in 8 24.2 23.7 102%
2 in 8 11.5 11.9 97%
1 in 8 4.91 5.94 83%
Recovery (µmol/L)
Solution1Observed2Expected3%O/E4
1 — 7.41 — —
A 13.3 13.3 100%
B 20.2 19.5 104%
C 34.4 32.0 108%
2 — 9.96 — —
A 14.7 15.7 94%
B 22.6 22.0 103%
C 36.2 34.5 105%
3 — 13.3 — —
A 16.9 18.9 89%
B 26.0 25.1 104%
C 32.0 37.6 85%

IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20) 7
Solution1Observed2Expected3%O/E4
4 — 20.2 — —
A 27.7 25.4 109%
B 33.0 31.7 104%
C 44.5 44.2 101%
Method Comparison 1
Kit A, µmol/L
0 10 20 30 40
IMMULITE 2000 Homocysteine
0
10
20
30
40
(IML 2000) = 1.0 (Kit A) + 0.024 µmol/L
r = 0.966
Method Comparison 2
HPLC, µmol/L
0 10 20 30 40 50
IMMULITE 2000 Homocysteine
0
10
20
30
40
50
(IML 2000) = 0.97 (HPLC) + 0.71 µmol/L
r = 0.974
Method Comparison 3
Kit B, µmol/L
5 10 15 20 25
IMMULITE 2000 Homocysteine
5
10
15
20
(IML 2000) = 0.90 (Kit B) – 0.02 µmol/L
r = 0.925
Effect of Storage Temperature on
Different Sample Types
Graph 1: Heparin
Graph 2: EDTA

8 IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20)
Graph 3: Serum
Deutsch. Precision: 1Intra-Assay, 2Gesamt,
3Mittelwert, 4S (Standardabweichung), 5CV
(Variationskoeffizient). Linearity: 1Verdünnung,
2Beobachtet (B), 3Erwartet (E), 4% B/E, 58 in 8.
Recovery: 1Probe, 2Beobachtet (B), 3Erwartet
(E), 4% B/E. Specificity: 1Verbindung,
2zugesetzte Menge, 3% Kreuzreaktivität, 4NN:
Nicht nachweisbar. Method Comparison:
Homocysteine: Homocystein.
Español. Precision: 1Intraensayo, 2Total,
3Media, 4DS, 5CV. Linearity: 1Dilución,
2Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E, 58 en 8.
Recovery: 1Solución, 2Observado (O),
3Esperado (E), 4%O/E. Specificity:
1Compuesto, 2Cantidad añadida, 3% Reacción
cruzada, 4ND: no detectable. Method
Comparison: Homocysteine: Homocisteína.
Français. Precision: 1Intraessai, 2Total,
3Moyenne, 4SD, 5CV. Linearity: 1Dilution,
2Observé (O), 3Attendu (A), 4%O/A, 58 dans 8.
Recovery: 1Solution, 2Observé (O), 3Attendu
(A), 4%O/A. Specificity: 1Composé, 2ajouté,
3Réaction croisée %. 4ND: non détectable.
Method Comparison: Homocysteine:
Homocystéine.
Italiano. Precision: 1Intra-serie, 2Totale, 3Media,
4SD (Deviazione Standard), 5CV (Coefficiente di
Variazione). Linearity: 1Diluizione, 2Osservato
(O), 3Atteso (A), 4%O/A, 58 in 8. Recovery:
1Soluzione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A.
Specificity: 1Composto, 2quantità aggiunta,
3Percentuale di Crossreattività, 4ND: non
determinabile. Method Comparison:
Homocysteine: Omocisteina.
Português. Precision: 1Entre-ensaios, 2Total,
3Média, 4Desvio padrão, 5Coeficiente de
variação. Linearity: 1Diluição, 2Observado (O),
3Esperado (E), 4%O/E, 58 em 8. Recovery:
1Solução, 2Observado (O), 3Esperado (E),
4%O/E. Specificity: 1Composto, 2Quantidade
adicionada, 3Percentagem de reacção cruzada,
4ND: não detectável. Method Comparison:
Homocysteine: Homocysteine.
Deutsch
Homocystein
Anwendung: Zur in vitro-Diagnostik unter
Verwendung des IMMULITE 2000
Systems - zur quantitativen Bestimmung
von L-Homocystein im Plasma oder
Serum humanen. Diese Bestimmungen
können in der Diagnose und Therapie von
Patienten mit Homocysteinurie oder
Hypercysteinämie hilfreich sein.
Artikelnummern: L2KHO2 (200 Tests)
Testcode: HCY Farbe: dunkelgrau
Warnung: Bei einer Behandlung mit S-
Adenosyl-Methionin enthaltenden
Therapeutika können falsch-erhöhte
Homocystein-Spiegel gemessen werden.
Ergebnisse von Patienten, die mit
Methotrexat, Carbamazepin, Phenytoin,
NOx, krampflösenden Mekikamenten oder
6-Azauridin Triacetate therapiert wurden,
sollten vorsichtig interpretiert werden, da
die Substanzen bei der Homocystein-
Bestimmung interferieren.
Klinische Relevanz
Das Homocystein (tHcy) hat sich als ein
wichtiger Risikofaktor zur Beurteilung
kardiovaskulärer Erkrankungen
herausgestellt.3–7,12 Homocystein, eine
schwefelhaltige Aminosäure entsteht bei
der Demethylierung des Methionins. Es
kann bei Bedarf wiederum zur
Methioninbildung durch die Folsäure
abhängige Methionin-Synthase verwendet
werden oder zur Cystein-Synthese über
den B-6 abhängigen sogenannten
Transsulfurationsweg.1,2 Im Plasma
kommt Homocystein hauptsächlich
proteingebunden vor, es liegen aber auch
freie, oxidierte und Disulfit-Formen vor.
Stark erhöhte Homocystein-Spiegel
werden bei Patienten mit Homocysteinurie
gefunden.1,2,3 Hierbei handelt es sich um
einen seltenen genetischen Defekt der
Enzyme des Homocystein-Stoffwechsels.
Patienten mit Homocysteinurie zeigen
Thrombosen, Entwicklungsstörungen und
eine frühe Arteriosklerose.1Weniger
schwere genetische Defekte sind mit
geringfügig erhöhten Homocystein-
Spiegeln verbunden.3,4,5

IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20) 9
Es hat sich herausgestellt, dass
Homocystein ein Indikator
kardiovaskulärer Erkrankungen ist. Eine
Metaanalyse 27 epidemiologischer
Studien zeigte, dass eine Erhöhung der
Homocystein-Konzentration um 5 µmol/l
das Risiko für kardiovaskulare
Erkrankungen bei Männer 1,6-fach und
bei Frauen 1,8-fach erhöht. Dieselbe
Erhöhung des Risikos wird bei einer
Erhöhung der Cholesterinkonzentration
um 0,5 mmol/l beobachtet.7Ebenso
werden bei Patienten mit chronischer
Nierenerkrankung und kardiovaskulärer
Erkrankungen erhöhte Homocystein-
Spiegel gefunden. Ursache dafür ist der
krankheitsbedingte Funktionsverlust der
Niere, die das Homocystein nicht mehr
aus dem Blut herausfiltern kann.1,2,3
Methodik
Kompetitiver Immunoassay.
Zuerst wird mit dem IMMULITE 2000 eine
automatische Ein-Schritt Vorbehandlung
der Patienten Plasma- oder Serumprobe
durchgeführt. Die Probe wird in einem
Röhrchen ohne Kugel mit DTT und der S-
Adenosyl-L-Homocystein (SAH) Hydrolase
inkubiert. Nach dieser 30 minütigen
Inkubation wird die so behandelte Probe
in ein zweites Röhrchen überführt. Dieses
Röhrchen enthält die mit SAH
beschichtete Kugel und einen mit
alkalischer Phosphatase markierten
Antikörper gegen SAH. Während der nun
folgenden 30 minütigen Inkubation
konkurriert das im Vorbehandlungsschritt
gebildete SAH in der Probe mit dem
immobilisierten SAH an der Kugel um die
Bindungsstellen des mit alkalischer
Phosphatase markierten Anti-SAH-
Antikörpers. Überschüssiges
Enzymkonjugat wird im folgenden
Waschschritt entfernt. Im nächsten Schritt
wir Substrat zugegeben. Die weiteren
Schritte erfolgen wie im Handbuch
dargestellt.
Inkubations-Schritte: 2 × 30 minuten. 2
Positionen in der Inkubationskette: 1
Röhrchen zur Probenvorbehandlung; 1
Röhrchen für die Immunreaktion.
Schritt 1: Freisetzung des gebundenen
Homocysteins und Umwandlung zum
SAH.
Schritt 2: Immunreaktion.
Probengewinnung
Die Verwendung von Heparin- bzw.
EDTA-Plasma wird empfohlen. Die
Verwendung von Serumproben ist
ebenfalls möglich. Das Plasma / Serum
muss möglichst schnell von den Blutzellen
getrennt werden, da von den Erythrozyten
Homocystein synthetisiert wird. Aus
diesem Grund sollten die Blutproben
bis zur Zentrifugation auf Eis gelagert
werden. Diese notwendige Lagerung auf
Eis macht die Verwendung von
Serumproben schwierig.
Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zur
Klärung von lipämischen Proben
empfohlen.
Bei hämolysierten Proben besteht die
Möglichkeit einer unsachgemäßen
Handhabung vor Eintreffen im Labor,
daher sind die Ergebnisse mit Vorsicht zu
interpretieren.
Die Zentrifugation der Serumproben vor
dem völligen Abschluss der Gerinnung
kann zu Fibringerinnseln führen. Um
fehlerhaften Analysenergebnissen infolge
von Gerinnseln vorzubeugen, ist
sicherzustellen, dass die Gerinnung vor
der Zentrifugation der Proben vollständig
abgeschlossen ist. Insbesondere Proben
von Patienten unter Antikoagulantien-
therapie können eine verlängerte
Gerinnungszeit aufweisen.
Blutentnahmeröhrchen von verschiedenen
Herstellern können differierende Werte
verursachen. Dies hängt von den
verwendeten Materialien und Additiven
(Gel oder physische Trennbarrieren,
Gerinnungsaktivatoren und /oder
Antikoagulantien) ab. IMMULITE 2000
Homocystein sind nicht mit allen
möglichen Röhrchenvariationen
ausgetestet worden. Details der
getesteten Röhrchenarten sind dem
Kapitel "Alternative Probenarten" zu
entnehmen.
Erforderliche Menge: 15 µl Plasma oder
Serum.
Lagerung: 14 Tage bei 2–8°C oder
6 Monate bei –20°C.
Hinweise und
Vorsichtsmaßnahmen
Zur In-vitro-Diagnostik.

10 IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20)
Reagenzien: Bei einer Temperatur von
2–8°C lagern. Gemäß der anwendbaren
Vorschriften verwerfen.
Die allgemein gültigen
Vorsichtsmaßnahmen sind zu beachten
und alle Komponenten als potentiell
infektiöses Material zu behandeln. In
diesem Testbesteck enthaltenen
Reagenzien humanen Ursprungs
erwiesen sich bei der Prüfung auf Syphilis,
Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2,
Hepatitis-B-Oberflächenantigen und
Hepatitis-C-Antikörper als negativ.
Bestimmten Komponenten wurde
Natriumazid (<0,1 g/dl) hinzugefügt. Um
die Bildung von explosiven Metallaziden in
Blei- und Kupferrohren zu verhindern,
sollten die Reagenzien nur zusammen mit
großen Wassermengen in die Kanalisation
gespült werden.
Chemilumineszenz–Substratmodul:
Kontaminationen sowie direkte
Sonnenlichteinwirkungen müssen
vermieden werden. (Siehe
Packungsbeilage.)
Wasser: Destilliertes bzw. deionisiertes
Wasser benutzen.
Im Lieferumfang enthalten
Die Bestandteile der Testpackung sind
aufeinander abgestimmt. Die Barcode-
Aufkleber auf der Innenverpackung
werden zur Testdurchführung gebraucht.
Homocystein Kugel-Container
(L2HO12)
Der barcodierte Kugel-Container enthält
200 Polystyrol-Kugeln beschichtet mit S-
Adenosyl-L-Homocystein (SAH). Bei
2–8°C bis zum Ablaufdatum haltbar.
L2KHO2: 1 Container.
Homocystein Reagenzbehälter
(L2HOA2)
Der barcodierte Reagenz-Container
enthält 3 Reagenzien: 15,5 ml S-Adenosyl-
L-Homocystein Hydrolase (Rind) in Puffer
(mit Konservierungsmittel), 18,5 ml
Dithiothreitol (DTT) in Puffer und 11,5 ml
alkalische Phosphatase konjugiert mit
monoklonalen Anti-SAH Antikörpern
(Maus) in Puffer. Bei 2–8°C bis zum
Ablaufdatum haltbar.
L2KHO2: 1 Behälter.
Vor Gebrauch den Aufkleber an der
Perforation abreißen, ohne dabei die
Barcodierung zu beschädigen. Die Folie
von der Oberseite des Containers
entfernen. Den Schiebedeckel nach unten
in die Führung des Reagenziendeckels
einrasten lassen.
Homocystein Kalibratoren (LHOL,
LHOH)
Zwei braune Fläschchen (niedrig und
hoch), mit je 2,0 ml synthetisch
hergestelltem S-Adenosyl-L-Homocystein
(SAH) in Protein/Puffer-Matrix. 30 Tage
nach dem Öffnen bei 2–8°C haltbar oder
6 Monate bei –20°C (aliquotiert).
L2KHO2: 1 Set
Vor der Kalibrierung die entsprechenden
Aufkleber (dem Kit beiliegend) auf
Röhrchen kleben, so daß die Barcodes
vom Barcodereader des Systems gelesen
werden können.
Separat erhältliche Testsystem-
Komponenten
Homocystein–Verdünnungspuffer
(L2HOZ)
Zur automatischen Verdünnung von
Proben hoher Konzentration. Es enthält
25 ml Konzentrat (gebrauchsfertig)
Homocystein-freie Protein-Puffermatrix.
Lagerung: 30 Tage (nach Öffnen) bei 2–
8°C oder 6 Monate bei –20°C (aliquotiert).
Zum Einsatz des Verdünnungsreagenz
(Diluents) werden Barcode Etiketten
mitgeliefert. Vor Verwendung ein
entsprechendes Etikett so auf ein
16×100 mm Teströhrchen kleben, dass es
vom eingebauten Barcode Reader
gelesen werden kann.
L2HOZ: 3 Etiketten
L2SUBM: Chemilumineszenz-
Substratmodul
L2PWSM: Waschmodul
L2KPM: Reinigungsmodul
LRXT: (Einmal-) Reaktionsgefäße
L2ZT: 250 Teströhrchen (16 × 100 mm)
für die Probenverdünnung
L2ZC: 250 Röhrchenverschlüsse für die
Probenverdünnung
CCCM: Kardiomarker-Kontrolle (4
Analyte, 2 Konzentrationen), kann über
die DPC Biermann GmbH bezogen
werden.

IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20) 11
Ebenfalls benötigt
Destilliertes bzw. deionisiertes Wasser;
Teströhrchen, Kontrollen.
Testdurchführung
Für eine optimale Funktion des Gerätes ist
unbedingt zu beachten, dass die
Wartungen, wie im IMMULITE 2000-
Handbuch beschrieben, regelmäßig
durchgeführt werden.
Hinweise zur Vorbereitung, täglichen
Inbetriebnahme des Systems, der
Kalibrierung sowie Verfahren zur Test-
und Qualitätskontrolle entnehmen Sie bitte
dem IMMULITE 2000-Handbuch.
Empfohlenes Kalibrationsintervall:
4 Wochen.
Qualitätskontrollseren:
Kontrollen oder Seren mit Homocystein in
zumindest zwei Konzentrationen (niedrige
und hohe) verwenden.
Referenzwerte
Da Referenzbereiche von der Auswahl
des Probandenkollektivs und von
regionalen Gegebenheiten abhängig sind,
sollte jedes Labor eigene
Referenzbereiche ermitteln. In der
Literatur wird ein Referenzbereich von 5-
15 µmol/l für erwachsene Männer und
Frauen beschrieben. Es muss
berücksichtigt werden,11 dass bei Männern
tendenziell höhere Werte gefunden
werden als bei Frauen. Hinzu kommt,
dass postmenopausale Frauen höhere
Werte zeigen als prämenopausale
Frauen.12
In einer Studie des Herstellers wurde
Homocystein in 120 Proben von
anscheinend gesunden Probanden (Alter
22-66 Jahre) mit dem IMMULITE 2000
bestimmt. Die Probenabnahme erfolgte in
Heparin-Röhrchen, die bis zur Trennung
der Zellen vom Plasma auf Eis gelagert
wurden. Es wurde ein Median von
7,7 µmol/l und ein 95% Vertrauensbereich
von 5,0 – 12 µmol/l ermittelt.
Diese Grenzwerte sind lediglich als
Richtlinien aufzufassen. Jedes Labor
sollte seine eigenen Referenzbereiche
etablieren.
Grenzen der Methode
Bei einer Behandlung mit S-Adenosyl-
Methionin enthaltenden Therapeutika
können falsch-erhöhte Homocystein-
Spiegel gemessen werden.
Obwohl die Substanzen Carbamazepin,
Phenytoin, 6-Azauridin und Anthopterin
keine Kreuzreaktivität zeigen, sollten
Proben von Patienten, die mit diesen
Medikamenten behandelt werden, sowie
von Patienten, die mit Methotrexat,
Stickstoffoxiden oder anderen
Antikonvulsiva behandelt werden mit
Vorsicht interpretiert werden, da diese
Substanzen in einigen Homocystein-
Assays interferieren können.
Heterophile Antikörper in Humanseren
können mit Immunglobulinen aus den
Assaykomponenten reagieren und
Interferenzerscheinungen innerhalb des in
vitro Immunoassays verursachen. (Clin.
Chem. 1988:34:27-33) Proben von
Patienten, die häufig mit Tier- bzw.
Tierserumprodukten zu tun haben, können
die erwähnten Interferenzen verursachen
und zu anomalen Resultaten führen. Die
verwendeten Reagenzien sind so
konzipiert, dass das Risiko einer
Interferenz mit den zu messenden Proben
minimiert ist. Dennoch können potentiell
Interaktionen zwischen seltenen Seren
und den Testkomponenten auftreten. Zu
diagnostischen Zwecken sollten die mit
dem Assay erhaltenen Ergebnisse immer
in Kombination mit der klinischen
Untersuchung, der Patientenanamnese
und anderen Befunden gesehen werden.
Leistungsdaten
Repräsentative Daten zum Test
entnehmen Sie bitte den Tabellen und
graphischen Darstellungen im englischen
Teil dieser Anleitung. Die Ergebnisse sind
in µmol/l angegeben. (Wenn nicht anders
dargestellt, wurden alle Untersuchungen
mit Heparin-Proben durchgeführt).
Messbereich: 2–50 µmol/l
Die Methode ist rückführbar auf einen
internen Standard, der mittels qualifizierter
Materialien und Messmethoden hergestellt
wurde.
Analytische Sensitivität: 0,5 µmol/l
Präzision: Verschiedene Proben wurden
in Vierfachbestimmung über mehrere
Tage bestimmt in einer Gesamtzahl von

12 IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20)
20 Läufen mit 80 Bestimmungen. (Siehe
"Precision" Tabelle.)
Linearität: Proben wurden in
verschiedenen Verdünnungen getestet.
(Repräsentative Daten entnehmen Sie
bitte der Tabelle „Linearity“.)
Wiederfindung: Proben wurden mit drei
Lösungen (125, 250 und 500 µmol/l) im
Verhältnis von 1:19 versetzt. (Siehe
Tabelle ”Recovery” für repräsentative
Daten.)
Spezifität: Der Assay ist hochspezifisch
für Homocystein. (Siehe Tabelle
”Specificity”.)
Bilirubin: Konjugiertes und
unkonjugiertes Bilirubin hat in
Konzentrationen bis zu 200 mg/l keinen
Einfluss auf die Messung, der größer als
die Impräzision des Assays selbst ist.
Hämolyse: Hämoglobin hat in
Konzentrationen bis zu 512 mg/dl keinen
Einfluss auf die Ergebnisse, der größer als
die Impräzision des Assays selbst ist.
Lipämie: Triglyceride haben in
Konzentrationen bis zu 3 000 mg/dl
keinen Einfluss auf die Ergebnisse, der
größer als die Impräzision des Assays
selbst ist.
Verschiedene Probenmaterialien: Die
Untersuchungen zum Einsatz
verschiedener Probenmaterialien wurde
folgendermaßen durchgeführt: Von 34
Probanden wurde Blut in Heparin, EDTA
und Serumröhrchen entnommen. Die
Proben wurden zentrifugiert, mit
Homocystein gespikt und mit dem
IMMULITE 2000 Homocystein analysiert.
Folgende Ergebnisse wurden gefunden:
(EDTA) = 0,98 (Heparin) + 0,85 µmol/l
r = 0,954
(Serum) = 1,02 (Heparin) – 0,53 µmol/l
r = 0,975
Mittelwerte:
20,2 µmol/l (Heparin)
20,7 µmol/l (EDTA)
20,1 µmol/l (Serum)
Um den Einfluss der Temperatur auf die
Homocysteinkonzentration bei der
Probenlagerung zu untersuchen, wurde
Heparin-, EDTA-Plasma sowie Serum von
5 Probanden entnommen. Vor der
Zentrifugation wurden Röhrchen bei
Raumtemperatur oder auf Eis gelagert.
Die graphische Darstellung zeigt die
zeitabhängige Veränderung der
Homocystein-Konzentration durch die
Lagerung bei unterschiedlichen
Temperaturen. (Siehe Graph 1-3)
Methodenvergleich 1: Der Assay wurde
mit einem kommerziell erhältlichen
manuellen Enzymimmunoassay (Kit A) auf
der Basis von 168 Plasmaproben
(Konzentrationsbereich: 4–43 µmol/l)
verglichen. Siehe graphische „Method
Comparison 1.“) Berechnung der linearen
Regression:
(IML 2000) = 1,0 (Kit A) + 0,24 µmol/l
r = 0,966
Mittelwerte:
12,9 µmol/l (IMMULITE 2000)
12,7 µmol/l (Kit A)
Methodenvergleich 2: Der Assay wurde
mit einer in-house HPLC-Methode in
einem Referenzlabor in den USA auf der
Basis von 95 Heparin-Plasma Proben
(Konzentrationsbereich: 4–44 µmol/l)
verglichen. Siehe graphische „Method
Comparison 2.“) Berechnung der linearen
Regression:
(IML 2000) = 0,97 (HPLC) + 0,71 µmol/l
r = 0,974
Mittelwerte:
13,4 µmol/l (IMMULITE 2000)
13,2 µmol/l (HPLC)
Methodenvergleich 3: Der Assay wurde
mit einem weiteren kommerziell
erhältlichen Immunoassay (Kit B) auf der
Basis von 113 Plasmaproben
(Konzentrationsbereich: 4–23 µmol/l)
verglichen. Siehe graphische „Method
Comparison 3.“) Berechnung der linearen
Regression:
(IML 2000) = 0,90 (Kit B) – 0,02 µmol/l
r = 0,925
Mittelwerte:
8,7 µmol/l (IMMULITE 2000)
9,6 µmol/l (Kit B)
Anwendungsberatung
Bei Rückfragen wenden Sie sich bitte an
Ihre Siemens Medical Solutions
Diagnostics Niederlassung.
Das Qualitätsmanagement-System der Siemens
Medical Solutions Diagnostics ist zertifiziert nach
DIN EN ISO 13485:2003.

IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20) 13
Español
Homocisteína
Utilidad del Test: Para el diagnóstico in
vitro usado con el Analizador IMMULITE
2000, para la medición cuantativa de
L-homocisteína en suero humano o
plasma. Este kit no está pensado para el
diagnóstico y tratamiento de los pacientes
que tengan hiperhomocistinemia u
homocistinuria.
Números de Catálogo:
L2KHO2 (200 tests)
Código del Test: HCY Color: Gris oscuro
Aviso: Las muestras de pacientes
bajo terapia con S-adenosil-metionina
pueden generar niveles falsamente
elevados de homocisteina.
Los resultados de las muestras de
pacientes en tratamiento con
methotrexato, carbamacepina,
fenitoina, óxido nitroso,
anticonvulsivos o triacetato
6-azauridina deben interpretarse con
precaución ya que estas sustancias
interfieren con la determinación de la
homocisteina.
Resumen y Explicación
del Test
La Homocisteína total (tHcy) ha salido a la
luz como un importante factor predictivo
para evaluar la enfermedad
cardiovascular.3-7,12 Hcy, es un aminoácido
que contiene un grupo tiol, producto de la
demetilación intracelular de metionina. Por
ello, Hcy sirve como pool que puede ser
usado mas tarde para regenerar
metionina mediante la acción de la enzima
metionina sintetasa folato dependiente o
cisteína usando la vía de transulfuración
B6 dependiente1,2 Hcy se encuentra en
plasma principalmente unido a proteínas,
pero también están presentes formas
libres, oxidadas y disulfuro.
Altos niveles de tHcy son encontradas en
pacientes con homocistinuria, un raro
desorden genético de enzimas
involucradas en el metabolismo de Hcy1,2,3
Pacientes con homocistinuria presentan
tromboembolismo arterial, retraso mental
y arteriosclerosis.1Defectos genéticos
menos severos también están asociados
con moderadamente elevados niveles de
Hcy.3,4,5
La homocisteína ha sido identificada
como marcador de enfermedad
cardiovascular. Un meta análisis 27
estudios epidemiológicos sugiere que un
incremento de 5 µmol/l en tHcy podría ser
asociado con un incremento del ratio de
probabilidad de enfermedad arterial o
coronaria (CAD) de 1,6 para hombres y
1,8 para mujeres, el mismo incremento de
riesgo que un aumento de 0,5 mmol/l de
colesterol.7Además, pacientes con
enfermedad renal crónica complicada con
arteriosclerosis cardiovascular presentan
elevada tHcy debido a la incapacidad del
riñón para eliminar la Hcy de la sangre.1,2,3
Principio del Test
Inmunoensayo competitivo.
IMMULITE 2000 realiza un ciclo de
pretratamiento de la muestra de plasma o
suero del paciente con S-adenosil-L-
homocisteína (SAH) hidrolasa y solución de
ditiotriol (DTT) en un tubo de reacción sin
bola. Después de una incubación de 30
minutos, la muestra tratada es transferida a
un segundo tubo de reacción con una bola
de poliestireno recubierta de SAH y
fosfatasa alcalina unida a un anticuerpo
especifico para SAH. Durante 30 minutos
de incubación, la SAH transformada de la
muestra pretratada compite con la SAH
inmobilizada por la unión al anticuerpo anti-
SAH unido a fosfatasa alcalina. El
conjugado enzimático no unido es
eliminado mediante un lavado por
centrifugación. El substrato es añadido y el
proceso continúa como el resto de los
inmunoensayos, tal y como se describe en
el manual del operador.
Ciclos de incubación: 2 × 30 minutos. 2
posiciones de test por ensayo: una cubeta
de muestra para el pretratamiento; una
cubeta para la inmunoreacción.
Primer Ciclo: Liberación de la
homocisteina unida y conversión a SAH.
Segundo Ciclo: Inmunoreacción.
Recogida de la muestra
Plasma heparinizado y EDTA son las
muestras de elección, pero el suero

14 IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20)
también puede ser utilizado. Es
importante separar el plasma o suero de
las células lo antes posible después de la
recogida de la muestra, debido a que la
síntesis de HCY puede tener lugar en los
eritrocitos después de la toma de muestra.
Las muestras deberían ser
conservadas en hielo entre la toma de
muestra y su centrifugación. La
conservación en hielo hace
particularmente difícil el uso de muestras
de suero.
Se recomienda el uso de una
ultracentrífuga para aclarar las muestras
lipémicas.
Las muestras hemolizadas podrían indicar
una mala manipulación de la muestra
antes de ser recibida por el laboratorio; en
este caso, los resultados deben
interpretarse con precaución.
La centrifugacion de las muestras de
suero antes de que se forme el coagulo
puede ocasionar la presencia de fibrina.
Para evitar resultados erroneos debidos a
la presencia de fibrina, asegurarse que se
ha formado el coagulo completamente
antes de centrifugar las muestras.
Algunas muestras, particularmente
aquellas de pacientes sometidos a terapia
anticoagulante, pueden requerir mayor
tiempo de coagulacion.
Los tubos para recoger sangre de
distintos fabricantes pueden producir
valores diferentes, dependiendo del
material del tubo y de los aditivos,
incluyendo barreras de gel o barreras
físicas, activadores de la coagulación y/o
anticoagulantes. El Homocisteína
IMMULITE 2000 no ha sido analizado con
todos los distintos tipos de tubos. Para
obtener detalles sobre los tipos tubos que
se han analizado, consulte la sección de
Tipos de Muestras Alternativos.
Volumen requerido: 15 µl plasma o
suero.
Conservación: 14 días a 2–8°C, o
6 meses a –20°C.
Advertencias y Precauciones
Para uso diagnóstico in vitro.
Reactivos: Mantener a 2–8°C. Desechar
de acuerdo con las normas aplicables.
Siga las precauciones universales y
manipule todos los componentes como si
fueran capaces de transmitir agentes
infecciosos. Los materiales derivados de
sangre humana han sido analizados y son
negativos para sífilis; para anticuerpos
frente al HIV 1 y 2; para el antígeno de
superficie de hepatitis B y para los
anticuerpos de hepatitis C.
Se ha usado Azida sodica, en
concentraciones menores de 0,1 g/dl,
como conservante. Para su eliminacion,
lavar con grandes cantidades de agua
para evitar la aparición de residuos de
azidas metalicas, potencialmente
explosivas, en las cañerias de cobre y
plomo.
Substrato quimioluminiscente: Evitar la
contaminación y exposición a la luz
directa del sol. (Ver el prospecto).
Agua: Usar agua destilada o desionizada.
Materiales Suministrados
Los componentes representan un juego
completo. Las etiquetas incluidas en la
caja son necesarias para el ensayo.
Cartucho de bolas de Homocisteína
(L2HO12)
Con código de barras. 200 bolas,
recubiertas con S-adenosil-L-homocisteína
(SAH). Estable a 2–8°C hasta la fecha de
caducidad.
L2KHO2: 1 cartucho.
Vial de reactivo de Homocisteína
(L2HOA2)
Con código de barras. Un cartucho,
contiene 3 reactivos: 15,5 ml S-adenosil-L-
homocisteína hidrolasa bobina en buffer
con conservantes, 18,5 ml de ditiotritiol
(DTT) en buffer, y 11,5 ml de fosfatasa
alcalina (de intestino de ternera)
conjugada con anticuerpo monoclonal
anti-SAH de ratón en buffer. Estable a
2–8°C hasta la fecha de caducidad.
L2KHO2: 1 vial.
Antes de usar, cortar la parte superior de
la etiqueta en la perforación, sin dañar el
código de barras. Quitar el precinto del
orificio del vial; encajar la cubierta
deslizante en las rampas de la tapa del
reactivo.
Ajustadores de Homocisteína (LHOL,
LHOH)
Dos viales ámbar(bajo y alto), con 2,0 ml
cada uno, de S-adenosil-L-homocisteína

IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20) 15
(SAH) derivada sintéticamente en una
matriz de proteina/buffer. Estable a 2–8°C
durante 30 días después de abrise, o
hasta 6 meses (alicuotados) a –20°C.
L2KHO2: 1 juego.
Antes de hacer un ajuste, colocar las
etiquetas a las alícuotas apropiadas
(suministradas con el kit) sobre tubos de
ensayo, de forma tal que los códigos de
barras puedan ser leídos por el lector.
Componentes del kit que se
suministran por separado
Diluyente de Homocisteína (L2HOZ)
Para la dilución de muestras de alta
concentración dentro del equipo. 25 ml de
un concentrado listo para usarse, de una
matriz proteica libre de Homocisteína.
Conservación: 30 días (después de su
apertura) a 2–8°C o 6 meses (alicuotado)
a –20°C.
Se suministran etiquetas con códigos de
barras para usarse con este diluyente.
Antes de uso, colocar la etiqueta con el
código de barras en un tubo de ensayo de
16 × 100 mm, así los códigos de barras
pueden ser identificados por el lector del
instrumento.
L2HOZ: 3 etiquetas
L2SUBM: Substrato quimioluminiscente
L2PWSM: Lavado de sonda
L2KPM: Kit de limpieza de sonda
LRXT: Tubos de reacción (desechables)
L2ZT: 250 Tubos De Prueba Del
Diluyente De la Muestra (16 × 100 mm)
L2ZC: 250 Casquillos Del Tubo Del
Diluyente De la Muestra
CCCM: Un módulo de control del
marcador cardiaco de dos niveles y
basado en suero no humano, que
contiene cuatro constituyentes distintos,
uno de los cuales es homocisteína.
También necesarios
Agua destilada o desionizada; tubos de
reacción, controles.
Ensayo
Aviso: para obtener el funcionamiento
óptimo, es importante realizar todos los
procedimientos del mantenimiento general
según lo definido en el manual del
operador de IMMULITE 2000.
Consulte el Manual del operador de
IMMULITE 2000 para: la preparación,
instalación, ajuste, ensayo y
procedimientos de control de calidad.
Intervalo de ajuste recomendado:
4 semanas.
Muestras de Control de Calidad: Utilizar
controles o pooles de sueros con al
menos dos niveles diferentes de
homocisteína (bajo y alto).
Valores Esperados
Los niveles de homocisteína pueden
variar con la edad, sexo, área geográfica y
factores genéticos, de manera que es
importante para los laboratorios
establecer sus propios rangos de
referencia basados en su población local.
En la bibliografía se sugiere un rango de
referencia de 5 – 15 µmol/l para adultos
hombres y mujeres,11 pero hay que tener
en cuenta que los hombres tienden a
mostrar niveles mas altos que las
mujeres, y las mujeres postmenopausicas
mas altos que las premenopausicas.12
120 muestras de sujetos adultos, hombres
y mujeres aparentemente sanos de edad
22–66 fueron analizados usando el kit de
Homocisteína IMMULITE 2000. Las
muestras tomadas en tubos de plasma
heparinizado y conservadas en hielo
previa separación del plasma de las
células. El valor medio fue 7,7 µmol/l, con
un rango central del 95%
5,0 – 12 µmol/l.
Estos límites han de considerarse sólo
como una guía. Cada Laboratorio deberá
establecer sus propios rangos de
referencia.
Limitaciones
Muestras de pacientes con terapia
farmacológica que involucre a la S-
adenosil-metionina puede mostrar niveles
de homocisteína falsamente elevados.
Aunque el análisis de los compuestos de
la familia de la carbamacepina, fenitoina,
6-azuridina y antopterina indican que no
existen las reacciones cruzadas, las
muestras de pacientes sometidos a
tratamientos con estas drogas, así como
con metotrexato, óxido nítrico y otros
anticonvulsivos, deben ser interpretadas
con precaución, ya que dichas sustancias
han mostrado interferecias con
determinados ensayos de homocisteina.

16 IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20)
Los anticuerpos heterofílicos en el suero
humano pueden reaccionar con las
inmunoglobulinas de los componentes del
ensayo provocando interferencias con los
inmunoanálisis in vitro. [Ver Boscato LM,
Stuart MC. Heterophilic antibodies: a
problem for all immunoassays. Clin Chem
1988:34:27-33.] Las muestras de los
pacientes que frecuentemente están
expuestos a animales o a productos
séricos animales pueden presentar este
tipo de interferencia que potencialmente
ocasione un resultado anómalo. Estos
reactivos han sido formulados para
minimizar el riesgo de interferencia, no
obstante, pueden darse interacciones
anómalas entre sueros conflictivos y los
componentes del ensayo. Con fines de
diagnóstico, los resultados obtenidos con
este ensayo siempre deben ser usados en
combinación con el examen clínico, la
historia médica del paciente y cualquier
otro dato clínico relevante.
Características Analíticas
Para ver resultados representativos de las
cualidades del ensayo ver las tablas y los
gráficos. Los resultados se expresan
en µmol/l. (a menos que se indique lo
contrario, los resultados fueron obtenidos
a partir de muestras de plasma
heparinizado.)
Rango de Calibración: 2 – 50 µmol/l
El ensayo es trazable a un estándar
interno fabricado usando procedimientos
de medida y materiales cualificados.
Sensibilidad: 0,5 µmol/l
Precision: Las muestras fueron
procesadas en cuadriplicado durante
varios dias, para un total de 20 tandas y
80 replicados. (Ver la tabla de
“Precision”).
Linealidad: Las muestras fueron
analizadas en varias diluciones. (Ver la
tabla de “Linearity” para resultados
representativos.)
Recuperación: Se analizaron muestras
sobrecargadas 1 en 19 con tres
soluciones (125, 250 y 500 µmol/l). (Ver la
tabla de “Recovery” para resultados
representativos.)
Especificidad: El ensayo es altamente
específico para homocisteína (Ver la tabla
de “Specificity”).
Bilirrubina: La presencia de bilirrubina
conjugada y no conjugada, en
concentraciones hasta 200 mg/l, no tienen
ningún efecto sobre los resultados en
términos de precisión.
Hemólisis: La presencia de hemoglobina,
en concentraciones hasta 512 mg/dl,no
tienen ningún efecto sobre los resultados
en términos de precisión.
Lipemia: La presencia de triglicéridos en
concentraciones hasta 3 000 mg/dl no
tiene efecto alguno en los resultados, en
lo correspondiente a la precisión del
ensayo.
Tipo de muestra alternativa: Para
determinar si el suero puede ser utilizado
con el kit de homocisteína IMMULITE
2000, la sangre fue recogida en hielo a
partir de 34 voluntarios dentro tubos
vacutainer con heparina, EDTA y vacíos.
Se separó las células de las muestras, y
fueron cargadas con homocisteína y
ensayadas con el kit de Homocisteína
IMMULITE 2000, con los siguientes
resultados.
(EDTA) = 0,98 (Heparin) + 0,85 µmol/l
r = 0,954
(Serum) = 1,02 (Heparin) – 0,53 µmol/l
r = 0,975
Medias:
20,2 µmol/l (Heparin)
20,7 µmol/l (EDTA)
20,1 µmol/l (Serum)
Para asegurar el efecto de la temperatura
de conservación, los tubos vacutainer
heparinizados, EDTA y vacíos fueron
recogidos de cinco voluntarios para cada
tipo de tubo. Algunos tubos fueron
conservados a temperatura ambiente,
mientras que otros fueron conservados en
hielo para varios periodos de tiempo
previamente a la separación. Los gráficos
muestran el efecto del tiempo de
conservación y la temperatura para
heparina, EDTA suero. (Ver gráficos 1-3).
Método Comparativo 1: El ensayo fue
comparado con un método enzimo
inmunoensayo manual comercialmente
disponible (Kit A) en 168 muestras de
plasma (Rango de concentración:
aproximadamente de 4 a 43 µmol/l. Ver el
gráfico "Method Comparison 1.") Por
regresión lineal:
(IML 2000) = 1,0 (Kit A) + 0,24 µmol/l
r = 0,966

IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20) 17
Medias:
12,9 µmol/l (IMMULITE 2000)
12,7 µmol/l (Kit A)
Método Comparativo 2: El ensayo fue
también comparado con HPLC método
usado en un laboratorio de referencia en
Estados Unidos, en 95 muestras de
plasma heparinizado (Rango de
concentración: aproximadamente de 4 a
44 µmol/l. Ver el gráfico "Method
Comparison 2.") Por regresión lineal:
(IML 2000) = 0,97 (HPLC) + 0,71 µmol/l
r = 0,974
Medias:
13,4 µmol/l (IMMULITE 2000)
13,2 µmol/l (HPLC)
Método comparativo 3: El ensayo fue
comparado con otro inmunoensayo (Kit B)
comercialmente disponible en 113
muestras de plasma (Rango de
concentración: aproximadamente de 4 a
23 µmol/l. Ver el gráfico "Method
Comparison 3.") Por regresión lineal:
(IML 2000) = 0,90 (Kit B) – 0,02 µmol/l
r = 0,925
Medias:
8,7 µmol/l (IMMULITE 2000)
9,6 µmol/l (Kit B)
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Contacte con su Distribuidor Nacional.
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Solutions Diagnostics está certificado por la
ISO 13485:2003.
Français
IMMULITE 2000 Homocystéine
Domaine d'utilisation : Pour le dosage
quantitatif de la L-homocystéine dans le
plasma ou le sérum humain. Ce test est
réservé à un usage in vitro diagnostic
avec l'Analyseur IMMULITE 2000 et
constitue une aide au diagnostic et au
suivi de patients atteints d'hyper-
homocystéinémie ou d'homocystinurie.
Référence catalogue: L2KHO2 (200 tests)
Code produit : HCY
Code couleur: Gris foncé
Attention: Les échantillons provenant
de patients recevant un traitement par
de la S-adénosyl-méthionine peuvent
donner des résultats d'homocystéine
faussement augmentés.
Les résultats provenant de patients
prenant l'un des médicaments
suivants méthotrexate,
carbamazépine, phénytoïne, oxide
nitreux, anti-convulsivants ou
6-azauridine triacétate doivent être
interprétés avec précaution car ces
substances interfèrent avec le dosage
de l'homocystéine.
Introduction
L'homocystéine totale (tHcy) a émergé
comme facteur de risque important dans
l'évaluation des maladies
cardiovasculaires.3-7,12 L'Hcy, un acide
aminé contenant un résidu thiol, est
produite par la déméthylation
intracellulaire de la méthionine. L'Hcy sert
ainsi de réserve qui peut ensuite être
utilisée pour la production soit de
méthionine sous l'action d'une enzyme
folates dépendante, la méthionine
synthétase, soit de cystéine en utilisant la
voie de transulfuration B6 dépendante. 1,2
L'Hcy plasmatique se trouve
principalement sous forme liée à une
protéine, néanmoins des formes libre,
oxydée et disulfure sont également
présentes.
Des concentrations de tHcy très élevées
se trouvées chez des patients atteints
d'homocystinurie, une maladie génétique
rare concernant les enzymes impliquées
dans le métabolisme de l'Hcy. 1,2,3 Les
patients atteints d'homocystinurie
présentent des pathologies
thromboemboliques artérielles, un retard
mental et une artériosclérose précoce.1
D'autres maladies génétiques moins
graves sont également associées à des
taux modérés d'Hcy.3,4,5
L'homocystéine a été identifiée comme
marqueur de maladies cardiovasculaires.
Une méta-analyse de 27 études
épidémiologiques a suggéré qu'une
augmentation de 5 µmol/l en Hcy pourrait
être associé à un facteur de risque de
maladies coronariennes artérielles (CAD)
de 1,6 pour les hommes et 1,8 for les
femmes, soit la même augmentation de

18 IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20)
risque qu'une augmentation de 0,5 mmol/l
du cholestérol.7De plus, les patients
atteints de pathologie rénale chronique
aggravée par une maladie
cardiovasculaire arthérosclérotique
présentent des taux d'Hcy élevés dus à
l'incapacité du rein à éliminer l'Hcy du
sang.1,2,3
Principe du test
Immunodosage par compétition
L'IMMULITE 2000 réalise un cycle de
prétraitement à bord des échantillons
plasmatiques ou sériques par la solution de
S-adenosyl-L-homocystéine (SAH)
hydrolase et de dithiothreitol (DTT) dans un
godet réactionnel ne contenant pas de bille.
Après une incubation de 30 minutes,
l'échantillon prétraité est transféré dans un
second tube contenant une bille de
polystyrène revêtue de SAH et un anticorps
spécifique de SAH. Pendant une incubation
de 30 minutes, le SAH modifié provenant
de l'échantillon prétraité entre en
compétition avec le SAH fixé pour se lier à
l'anticorps anti-SAH marqué à la
phosphatase alcaline. Le conjugué non lié
est éliminé par lavage et séparation par
ultracentrifugation. Le substrat est ajouté et
la procédure continue comme décrite pour
les immunodosages classiques dans le
Manuel d'Utilisation.
Cycles d'incubation : 2 × 30 minutes. 2
positions d'incubation par dosage : 1
godet pour le prétraitement; 1 godet pour
la réaction immunologique.
Cycle 1: Libération de l'homocystéine
liée et transformation en SAH.
Cycle 2: Réaction immunologique.
Recueil des échantillons
Les plasmas hépariné ou EDTA sontt
particulièrement recommandés, mais le
sérum est également utilisable. Il est
important de séparer le plasma ou sérum
des cellules dès que possible après
prélèvement, car la synthèse d'HCY peut
avoir lieu dans les hématies après le
prélèvement. Les échantillons doivent
être conservés dans la glace entre le
prélèvement et la centrifugation. Noter
que la conservation sur glace rend
particulièrement difficile l'utilisation
d'échantillons sériques.
Il est recommandé de clarifier les
échantillons hyperlipémiques par
ultracentrifugation.
Des échantillons hémolysés peuvent être
révélateurs d'une préparation inadéquate
du prélèvement avant son envoi au
laboratoire ; il faudra donc interpréter les
résultats avec prudence.
La centrifugation des échantillons
sériques avant la formation complète du
caillot peut entraîner la présence de
fibrine. Pour éviter les résultats erronés
dûs à la présence de fibrine, s'assurer de
la formation complète du caillot avant de
centrifuger les échantillons. Certains
échantillons, en particulier ceux provenant
de patients sous anti-coagulants, peuvent
nécessiter un temps plus long pour la
formation du caillot.
Des tubes pour prélèvements sanguins
provenant de fabricants différents peuvent
donner des résultats différents, selon les
matériaux et additifs utilisés, y compris
gels ou barrières physiques, activateurs
de la coagulation et/ou anticoagulants. Le
coffret Homocystéine IMMULITE 2000 n'a
pas été testé sur tous les types de tubes
possibles. Veuillez consulter le chapitre
intitulé Autres Types d'Échantillons pour
plus de renseignements sur les tubes qui
ont été évalués.
Volume nécessaire: 15 µl de plasma ou
de sérum.
Conditions de conservation: 14 jours à
+2°C/+8°C ou 6 mois à –20°C.
Précautions d'emploi
Réservé à un usage diagnostique in vitro.
Réactifs : conserver les réactifs à +2/
+8 °C. Eliminer les déchets conformément
à la réglementation en vigueur.
Respecter les précautions d'emploi et
manipuler tous les composants du coffret
comme des produits potentiellement
infectieux. Les réactifs dérivés de produits
humains et utilisés dans ce coffret ont subi
un test sérologique pour la Syphilis et des
tests de dépistage pour les anticorps anti-
VIH1 et 2, anti-HCV et pour l'antigène de
surface de l'hépatite B, qui se sont tous
avérés négatifs.
De l'azide de sodium à des concentrations
inférieures à 0,1 g/dl a été ajouté comme
conservateur ; lors de l'élimination,

IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20) 19
l'évacuer avec de grandes quantités d'eau
pour éviter une accumulation d'azides
métalliques explosifs dans les
canalisations.
Substrat chimiluminescent : éviter la
contamination et l'exposition directe au
soleil. (Voir notice).
Eau : utiliser de l'eau distillée ou
désionisée.
Matériel fourni
Les composants de la trousse ne peuvent
être utilisés que conjointement. Les
étiquettes à l'intérieur du coffret sont
nécessaires au dosage.
Cartouche de Billes Homocystéine
(L2HO12)
Avec code-barre. 200 billes revêtues de S-
adenosyl-L-homocystéine (SAH). Stable à
+2°C/+8°C jusqu'à la date de péremption.
L2KHO2: 1 cartouche.
Cartouche-Réactif Homocystéine
(L2HOA2)
Avec code-barre. Une cartouche
contenant 3 réactifs: 15,5 ml de S-
adenosyl-L-homocystéine hydrolase bovine
dans un tampon avec conservateur.
18,5 ml de dithiothreitol (DTT) dans un
tampon. 11,5 ml d'anti-SAH marqué à la
phosphatase alcaline (intestins de veau)
dans un tampon. Stable à +2°C/+8°C
jusqu'à la date de péremption.
L2KHO2: 1 cartouche.
Avant l'emploi, retirer la partie supérieure
de l'étiquette au niveau des perforations
en ayant soin de ne pas endommager le
code-barres. Retirer le film protecteur
situé sur la partie supérieure de la
cartouche-réactif ; insérer le couvercle
coulissant entre les glissières sur le
dessus de la cartouche-réactif.
Ajusteurs Homocystéine (LHOL, LHOH)
Deux flacons de couleur ambre “Haut” et
“Bas”, 2,0 ml chacun, de S-adenosyl-L-
homocystéine (SAH) synthétique dans une
matrice protéine/tampon. Stable à
+2°C/+8°C 30 jours après ouverture ou 6
mois (aliquoté) à –20°C.
L2KHO2: 1 jeu.
Avant de procéder à un ajustement, placer
les étiquettes correspondant à l'aliquot
(fournies avec le coffret) sur des tubes en
verre de sorte que les code-barres soient
lisibles par le lecteur.
Composants du coffret fournis
séparément
Diluant échantillon homocystéine
(L2HOZ)
Pour la dilution à bord des échantillons de
concentration élevée. 25 ml d'un
concentré prêt à l'emploi de matrice
tampon/ protéines, exempte de
homocystéine. Conservation : 30 jours
après ouverture à +2°C/+8°C ou 6 mois
(aliquoté) à –20°C.
Les étiquttes code-barres sont fournies
avec le Diluant. Avant utilisation, placer
l'étiquette appropriée sur un tube de
16×100 mm de façon que le code-barre
puisse être lu par le lecteur de l'appareil.
L2HOZ : 3 étiquettes
L2SUBM : Substrat chimiluminescent
L2PWSM : Solution de lavage
L2KPM : Coffret de décontamination de
l'aiguille de prélèvement
LRXT : Godets réactionnels (jetables)
L2ZT : 250 Tubes À essai De Diluant
échantillon (16 × 100 mm)
L2ZC : 250 Bouchons pour tubes de
diluants
CCCM : Contrôle Marqueurs Cardiaques
à deux niveaux, à base de sérum non
humain, dont l'un des quatre constituants
est la homocystéine.
Egalement requis
Eau distillée ou désionisée ; tubes ;
contrôles
Protocole de dosage
Noter que pour des performances
optimales, il est important de réaliser
toutes les procédures de maintenance de
routine selon les instructions du Manuel
d'Utilisation IMMULITE 2000.
Se reporter au manuel d'utilisation de
l'IMMULITE 2000 pour : la préparation, le
démarrage du système, les ajustements,
le dosage et les procédures de contrôle
de qualité.
Intervalle d'ajustement recommandé :
4 semaines.
Echantillons pour le contrôle de qualité :
Utiliser des contrôles ou des pools de
sérums avec au moins deux niveaux de

20 IMMULITE 2000 Homocysteine (PIL2KHO-14, 2007-11-20)
concentration (faible ou élevé)
d'homocystéine.
Valeurs attendues
Les taux d'homocystéine peuvent varier
avec l'âge, le sexe, le lieu géographique et
les facteurs génétiques, aussi il est
important pour les laboratoires d'établir
leurs propres valeurs de référence en
fonction de la population locale. La
littérature suggère un domaine de
référence de 5 – 15 µmol/l pour les
hommes et femmes adultes,11 mais fait
également remarquer que les hommes ont
tendance à avoir des taux plus élevés que
les femmes et que les femmes
ménopausées ont tendance à avoir des
taux plus élevés que les femmes non
ménopausées.12
Cent vingt échantillons provenant
d'hommes et de femmes adultes
apparemment en bonne santé
(âgés de 22 à 66 ans) ont été analysés
avec le test IMMULITE 2000
Homocystéine. Les échantillons ont été
prélevés sur tubes héparinés et conservés
dans la glace avant la séparation du
plasma et des cellules. La valeur médiane
était 7,7 µmol/l, avec un domaine centré à
95% de
5,0 – 12 µmol/l.
Utiliser ces valeurs à titre indicatif
uniquement. Chaque laboratoire devrait
établir ses propres valeurs de référence.
Limites
Les échantillons provenant de patients
suivant une thérapie médicamenteuse
comprenant du S-adenosyl-méthionine
peuvent donner des résultats
d'homocystéine faussement élevés.
Bien que l'analyse de composés
apparentés à la carbamazépine, à la
phénytoïne, à la 6-azauridine et à
l'anthoptérine n'indique pas de réaction
croisée, les échantillons prélevés sur des
patients traités avec l'un de ces
médicaments ainsi qu'avec du
méthotrexate, de l'oxyde nitreux ou tout
autre anti-convulsivant, doivent être
interprétés avec précaution, ces
substances montrant des interférences
avec certains tests de l'homocystéine
Les anticorps hétérophiles du sérum
humain peuvent réagir avec les
immunoglobulines faisant partie des
composants du coffret et interférer avec
les immunodosages in vitro. [Voir Boscato
LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a
problem for all immunoassays. Clin Chem
1988:34:27-33.] Les échantillons
provenant de patients fréquemment
exposés aux animaux ou aux produits
sériques d'origine animale peuvent
présenter ce type d'interférence pouvant
potentiellement donner un résultat
anormal. Ces réactifs ont été mis au point
afin de minimiser le risque d'interférence,
cependant des interactions potentielles
entre des sérums rares et les composants
du test peuvent se produire. Dans un but
diagnostique, les résultats obtenus avec
ce dosage doivent toujours être utilisés en
association avec un examen clinique,
l'histoire médicale du patient et d'autres
résultats.
Performances du test
Consulter les tableaux et graphiques pour
obtenir les données représentatives des
performances du test. Les résultats sont
donnés en µmol/l. (En l'absence de
précision supplémentaire, tous les
résultats ont été obtenus sur des
échantillons de plasma hépariné).
Domaine de mesure: 2 à 50 µmol/l.
Le dosage peut être retracé à un standard
interne, manufacturé à l’aide de matériaux
et procédures de mensuration qualifiées.
Sensibilité analytique: 0,5 µmol/l
Précision: Les échantillons ont été dosés
en quadruplet pendant plusieurs jours, soit
un total de 20 séries et de 80 résultats.
(Voir le tableau "Precision".)
Linéarité : les échantillons ont été testés
avec des taux de dilution variés (Voir le
tableau “ Linearity ”.)
Récupération: les échantillons testés ont
été chargés dans un rapport de 1 à 19
avec trois solutions d'homocystéine (125,
250 et 500 µmol/l). (Voir le tableau
“ Recovery ”.)
Spécificité: L'anticorps est hautement
spécifique de l'homocystéine. (Voir le
tableau "Specificity".)
Bilirubine: La présence de bilirubine
conjuguée et non conjuguée ne présente
aucun effet sur les résultats ni sur la