Agilent Technologies InfinityLab Poroshell 120 User manual

COLUMN USER GUIDE
for Agilent Normal-Phase
and HILIC Columns
Säulenbenutzerhandbuch
für Agilent Normalphasenund HILIC-Säulen
Guide d’utilisation des colonnes
les colonnes phase normale et les colonnes HILIC Agilent
Guía del usuario de columnas
para columnas de fase normal y de HILIC de Agilent
Manuale D’Uso per colonne
per colonne Agilent a fase normale e HILIC
カラム ユーザーガイド
AGILENT 順相 および HILIC カラム
色谱柱用户指南
适用于 Agilent 正相 和HILIC 色谱柱
Руководство пользователя
для колонок Agilent нормальной фазы и HILIC
Guia do usuário de colunas
para colunas Agilent de fase normal e colunas HILIC

This booklet provides general information for all InfinityLab
Poroshell 120, ZORBAX, Pursuit, and Polaris normal-phase
and HILIC columns. Initial sections include information for both
normal-phase and HILIC columns. Because some method
parameters and column care instructions are different for HILIC
versus normal phase, those sections are broken out separately
in the last few pages. For additional information about your
specific column or family,
see www.agilent.com/chem/columnchoices
Getting Started
A QC Column Performance Report, including a test chromatogram,
comes with every Agilent column. The QC test instrument is modified
(optimized) from a standard instrument to minimize extra column
volume, so it may vary from the system used in your lab. This allows a
better evaluation of the column and assures a more consistent product.
An LC system, optimized for low volume columns, will generate similar
results to the chromatogram on your QC Performance Report.
This booklet provides general information for all InfinityLab

ENGLISH
Installation
• The direction of flow is marked on the column.
• 1.8 µm columns (ZORBAX RRHT, ZORBAX RRHD) can only be
operated in the flow direction marked on the column.
• InfinityLab Poroshell 120 columns may be operated in the opposite flow
direction when cleaning the column. The frit porosity on the outlet of InfinityLab
Poroshell 120 columns is smaller than on the inlet and can plug more easily.
• Agilent recommends InfinityLab Quick Connect fittings (5067-5961 for
0.075 x 105 mm) or Quick Turn fittings (5067-5966) for a perfect column
connection, every time. Polyketone fittings (5042-8957) can also be used for
columns up to 600 bar.
Important Safety Considerations for all LC Columns
• All connection points in LC systems are potential sources of leaks. Users should
be aware of the toxicity or flammability of their mobile phases.
• Because of the small particle size, dry column packings are respirable. Columns
should only be opened in a well-ventilated area.
• Adhere to operating pressure limits noted for each column (see chart on next
page). Exceeding these limits will compromise chromatographic performance
and could be unsafe.
Polyketone fitting,
p/n 5042-8957
Agilent 1200 bar
removable fitting,
p/n 5067-4733
Agilent Quick Connect
fitting, p/n 5067-5961

Column Usage Tips
• Modern columns are robust and are designed to operate for long periods under
normal chromatographic conditions. You can maximize column lifetime by running
it within specifications. Always review the specifications before putting in place a
final method.
• While generally not harmful to the column, reverse flow should be avoided except
to attempt to clear a clogged frit (see “Installation” for exceptions).
• Always use high purity reagents and chromatography grade solvents or better to
prepare your mobile phase.
• Disassembling a column will degrade column performance.
• New columns contain a mixture of organic solvents. See your QC Performance
Report for the solvent composition in your column. Initially, care should be taken
not to pass any mobile phase through the column that may cause a precipitate or
an emulsion to form.
• Agilent normal-phase columns are compatible with water and all common
organic solvents.
Column Type Particle Size Pressure Limit
InfinityLab Poroshell 120 1.9 µm 1300 bar (19500 psi)
InfinityLab Poroshell 120 2.7 µm, 4 µm 600 bar (9000 psi)
ZORBAX Rapid Resolution
High Definition (RRHD)
1.8 µm 1300 bar (19500 psi)
ZORBAX Rapid Resolution
High Definition (RRHT)
1.8 µm 600 bar (9000 psi)
All other ZORBAX, Pursuit,
Polaris
3.0 µm, 3.5 µm, 5 µm,
10 µm
400 bar (6000 psi)
Rx, Metasil, Monochrom,
Microsorb
3.0 μm, 3.5 μm, 5 μm,
10 µm
400 bar (6000 psi)
Maximum Operating Pressures – Columns up to 9.4 mm id

ENGLISH
• T he use of a guard column is recommended to protect your column and increase
its lifetime.
• Columns should not be maintained at high pH or elevated temperature when not
in use.
• Avoid use of this column outside recommended pH range for column phase (see
next page). Expect reduced lifetime when operating outside the recommended
pH and temperature ranges.
Tips for Getting the Best Chromatographic Results
• Optimize your instrument by minimizing tubing lengths between components to
reduce extra column volume and band broadening. Use 0.12 mm id red or 0.075
mm id black tubing for Fast LC/high efficiency columns. Learn about capillary
options at www.agilent.com/chem/lccapillaries.
• When using normal-phase columns, ensure that your LC instrument’s rotor seals,
pump seals, tubing, and all other components are compatible with normal-phase
solvents.
• Make sure your data collection rate is optimized for your column. Use a higher
collection rate for Fast LC columns ( InfinityLab Poroshell 120, RRHT and RRHD).
• Use Agilent certified lamps in your LC instruments for best performance.
• Use sample filtration or other sample prep as appropriate for your sample. Learn
more at www.agilent.com/chem/sampleprep
If you are using InfinityLab Poroshell 120 or ZORBAX RRHT or RRHD
columns, use a Fast Guard for UHPLC to protect your analytical column.
See www.agilent.com/chem/fastguards for more information.

WORKING WITH NORMAL-PHASE COLUMNS
Every normal-phase column is tested before shipment and shipped in a normal-
phase test eluent, with the exception of ZORBAX Eclipse XDB-CN and, InfinityLab
Poroshell 120 EC-CN which are shipped in reversed-phase solvents and
InfinityLab Poroshell 120 HILIC and ZORBAX HILIC Plus which are shipped in
HILIC solvents. ZORBAX carbohydrate columns are shipped in acetonitrile. Care
should be taken to make sure the column has been properly equilibrated prior
to use. This will ensure reproducibility from analysis to analysis and help prevent
retention time drifting.
Phase Recommended
pH Range
Maximum
Operating
Temperature
Suggested
Operating
Temperature
InfinityLab Poroshell
120 EC-CN
pH 2.0 to 8.0 60 °C 30 °C
ZORBAX Eclipse
XDB-CN
pH 1.0 to 9.0 60 °C 30 °C
ZORBAX CN pH 2.0 to 8.0 60 °C 30 °C
ZORBAX
Carbohydrate
pH 2.0 to 8.0 60 °C 30 °C
ZORBAX NH2pH 2.0 to 7.0 60 °C 30 °C
ZORBAX Rx-SIL,
ZORBAX SIL
pH 1.0 to 8.0 Limited only by the
temperature limits of
the mobile phase
Pursuit, Po-
laris, Metasil, Mono-
chrom, Microsorb
pH 2.0 to 8.0 60 °C 30 °C
InfinityLab Poroshell
120 HILIC, ZORBAX
HILIC Plus
pH 1.0 to 8.0 Limited only by the
temperature limits of
the mobile phase
Normal-Phase Column Operating Parameters:
pH and Temperature
Operating at extreme ends of pH and temperature ranges will have a significant impact
on column lifetime.

ENGLISH
Note: All silica-based packings have some solubility in pH >6 aqueous mobile
phases. When using silica-based columns at pH >6, best column lifetime is
obtained at lower temperatures (40 °C Max) using low buffer concentrations in the
range of 0.01 to 0.02 M.
Normal-Phase Column Method Development Notes
The stationary phase is polar in nature and is best used with nonpolar mobile
phases such as methylene chloride/hexane or isopropanol/hexane mixtures.
Increasing the amount of the polar component in these mixtures typically reduces
the retention time of the sample.
Column Type Method Development Notes
ZORBAX NH2
Polaris NH2
Many column volumes of mobile phase are necessary
for equilibration to occur after changes in mobile phase
composition. The number of column volumes required
depends on the system in use and can be as high as
50 to 100 column volumes.
ZORBAX Rx-SIL
ZORBAX SIL
Pursuit XRs Si
Polaris Si-A
Microsorb Si
Unbonded silica columns are very sensitive to trace
amounts of water in solvents and sample, so care
must be taken to maintain consistency for method
reproducibility. When gradient elution is employed, both
primary and secondary solvents should be modified
with alcohol or acetonitrile and at least 30 columns of
solvent should be allowed to flow through the column
after completion of each run.
When switching between solvents, first rinse the
column with a mutually miscible solvent such as
isopropyl alcohol.
InfinityLab Poroshell 120
EC-CN
ZORBAX Eclipse XDB-CN
ZORBAX CN
InifintyLab Poroshell 120 EC-CN and ZORBAX Eclipse XDB-
CN columns are shipped with reversed-phase solvents,
but can also be used in normal-phase applications after
flushing with isopropanol.
Retention decreases as the polarity of the mobile phase
increases.
The rapid equilibration of this bonded phase with mobile
phase often makes it more convenient to use this column
than a silica column, especially for gradient elution.

Cleaning Your Column/Extending Column Life:
Normal-phase Columns
For normal phase, we recommend use of organic solvents. Use at least 20 column
volumes of each solvent, which is 50 mL if your column is the traditional analytical
4.6 x 250 mm. Try these solvents in order of increasing strength:
1. 50% methanol: 50% chloroform
2. 100% ethyl acetate
Cleaning a column used in normal-phase mode may depend on the sample type. If
these solvents do not work, contact Agilent so we can recommend a solvent that
may be more effective with your application and sample matrix.
Storage Recommendations: Normal-Phase Columns
Normal-phase columns can typically be stored in their own mobile phase for long
periods. Before storing the column, the end-fittings should be tightly capped with
end-plugs to prevent the packing from drying out.
WORKING WITH HILIC COLUMNS
HILIC is a method used for the separation of polar analytes inadequately retained
on typical reversed-phase columns. Agilent ZORBAX HILIC Plus and InfinityLab
Poroshell 120 HILIC columns are non-bonded silica columns, shipped in
acetonitrile:water or acetonitrile and ready to use for HILIC separations. ZORBAX
Carbohydrate columns are shipped in acetonitrile also ready for use in HILIC
mode. Like normal-phase columns, HILIC columns require more equilibration than
reversed-phase columns. Note that NH2, unbonded silica and CN columns can also
be used for HILIC applications. To change these columns to HILIC mode, flush first
with isopropyl alcohol.

ENGLISH
ZORBAX HILIC Plus
InfinityLab Poroshell 120
HILIC
Most common HILIC applications are for the analysis of
polar compounds that are unretained or poorly retained
on reversed-phase columns.
Best to equilibrate the column with 30-40% water in
acetonitrile before use.
Equilibration may require 20-50 column volumes.
A typical mobile phase is acetonitrile:water with an
acetate or formate buffer at 5-10 mM. Increasing buffer
concentration can improve peak shape and retention.
Decrease the aqueous/buffer component to increase
retention.
HILIC Method Development Notes
Operating Guidelines: HILIC
•Agilent HILIC columns are shipped containing acetonitrile:water or acetonitrile.
• Agilent HILIC columns are compatible with water and all common organic
solvents.
• All silica has some solubility in pH >6 aqueous mobile phases. Solubility of the
silica is also increased at elevated temperatures. Using the columns above pH 6
and 40 °C will reduce the column lifetime.
Column Name pH Range Maximum
Temperature
Suggested
Temperature
ZORBAX HILIC Plus
InfinityLab Poroshell 120
HILIC
pH 1.0 to 8.0 40 °C 30 °C
ZORBAX Carbohydrate pH 2.0 to 8.0 40 °C 30 °C
HILIC Column Operating Parameters
Operating at extreme ends of pH and temperature ranges will have a significant impact
on column lifetime.
As acetonitrile content of the mobile phase increases, the resolution of the sugars
may improve, with an accompanying increase in analysis time. The typical range
for the mobile phase is 60% to 75% acetonitrile. Resolution may be improved when
column temperature is above room temperature. Operation at 30 °C or 35 °C may
give better resolution of a carbohydrate mixture.

Cleaning Your Column/Extending Column Life:
HILIC Columns
Samples should be filtered before injecting on the column. This is particularly
important for the ZORBAX RRHD HILIC Plus column, as the column inlet frit is
nominally 0.5 µm and samples should be filtered through a 0.2 µm sample filter.
If solvent flow appears to be restricted (unusually high column backpressure),
check first to see that solvent flow is unobstructed up to the column inlet. If the
restriction is prior to the column, replace the appropriate piece of tubing or filter
that is plugged. If the column is plugged, InfinityLab Poroshell 120 HILIC can
be backflushed with 20-30 column volumes of mobile phase. The RRHD HILIC
column cannot be backflushed. To remove strongly-retained materials from the
column, flush the column with a strong solvent which in HILIC mode, is water.
Storage Recommendations: HILIC Columns
Acetonitrile:water (95:5) is recommended as the long-term storage solvent for
HILIC columns. It may be necessary to flush the column with acetonitrile:water
(60:40) to remove strongly-retained compounds prior to switching to the storage
solvent. Before storing the column, tightly cap the end fittings with the end plugs
to prevent the packing from drying out. Columns may be safely stored for short
periods in most HILIC mobile phases. However, to protect equipment, it is best
to remove salts from the instrument and column by purging the column with the
same mobile phase without the buffer (for example, using 90:10 ACN:H2O to
remove a 90:10 ACN:0.01M formate buffered mobile phase). Re-equilibration is
faster with the original mobile phase when using this approach, but several (3 to
6) injections should be made to verify column equilibration.

Diese Broschüre enthält allgemeine Informationen zu
allen ZORBAX-, Pursuit- und Polaris-Normalphasen- und
HILIC-Säulen. Die einleitenden Abschnitte enthalten
Informationen zu Normalphasen- und HILIC-Säulen. Da
manche Methodenparameter und Säulenpflegeanweisungen
für HILIC und Normalphase unterschiedlich sind, gibt es
hierzu separate Abschnitte auf den letzten Seiten. Zusätzliche
Informationen über Ihre spezifische Säule finden Sie unter
agilent.com/chem/columnchoices
Erste Schritte
Zu jeder Agilent Säule gibt es einen QC-Säulentestreport mit
Testchromatogramm. Bei dem QC-Testinstrument handelt es sich um
ein optimiertes Standardsystem, um das zusätzliche Säulenvolumen
zu minimieren. Es kann also von dem in Ihrem Labor verwendeten
System abweichen. Die Säule kann so besser evaluiert und eine
konsistente Produktqualität sichergestellt werden. Ein für Säulen
mit niedrigem Volumen optimiertes LC-System liefert ähnliche
Ergebnisse wie das Chromatogramm in Ihrem QC-Testreport.
DEUTSCH

Installation
• Die Flussrichtung ist auf der Säule angegeben.
• 1.8-µm-Säulen (ZORBAX RRH, ZORBAX RRHD) können nur in der
auf der Säule angegebenen Flussrichtung verwendet werden.
• Poroshell 120-Säulen können zur Reinigung der Säule mit umgekehrter
Flussrichtung verwendet werden. Die Fritte ist am Auslass der Poroshell
120-Säulen kleiner als am Einlass und kann leichter verstopfen.
• Agilent empfiehlt die Verwendung von Polyketone-Verschraubungen (Artikel-
nummer 5067-8957) für Säulen bis zu 600 bar. 1200-bar-Verschraubungen
(Artikelnummer 5067-4733) können für alle Anwendungen eingesetzt werden,
ob bei geringem Druck oder UHPLC-Drücken bis zu1200 bar.
Wichtige Sicherheitshinweise zu allen LC-Säulen
• Alle Anschlusspunkte in LC-Systemen sind potenzielle Quellen von Lecks.
Benutzer sollten daher die Toxizität bzw. Brennbarkeit ihrer mobilen Phasen
kennen.
• Da aufgrund der kleinen Partikelgröße die Gefahr des Einatmens von
Säulenpackungsmaterial besteht, sollten die Säulen nur in gut belüfteten
Räumen geöffnet werden.
• Halten Sie die spezifischen Säulendruckgrenzwerte ein (siehe Diagramm
auf nächster Seite). Eine Überschreitung dieser Werte beeinträchtigt die
Chromatografieleistung und kann gefährlich werden.

Tipps zur Säulennutzung
• Moderne Säulen sind robust und für den langfristigen Einsatz unter normalen
chromatografischen Bedingungen konzipiert. Die Lebensdauer der Säule kann
beim Einsatz innerhalb der Spezifikationen maximiert werden. Prüfen Sie stets die
Spezifikationen, bevor Sie eine endgültige Methode wählen.
• Die Verwendung der Säule entgegen ihrer Flussrichtung sollte vermieden werden,
außer bei dem Versuch, die verstopften Fritten zu säubern (Ausnahme siehe
„Installation“).
• Verwenden Sie für die Vorbereitung der mobilen Phase immer Reagenzien mit
hoher Reinheit und Lösungsmittel in Chromatografiequalität.
• Der Ausbau einer Säule kann zu einer Beeinträchtigung der Säulenleistung führen.
Säulentyp Partikelgröße Druckgrenzwert
ZORBAX NH2
ZORBAX HILIC Plus
ZORBAX Rx-SIL
ZORBAX SIL
ZORBAX CN
ZORBAX Eclipse XDB-CN
5 µm, 7 µm
3.5 µm
5 µm
5 µm, 7 µm
5 µm, 7 µm
3.5 µm, 5 µm, 7 µm
400 bar (6.000 psi)
ZORBAX Rapid Resolution
High Definition (RRHD)
HILIC Plus
1.8 µm 1200 bar (17.000 psi)
ZORBAX RRHT Rx-Sil 1.8 µm 600 bar (9.000 psi)
Polaris NH23 µm, 5 µm 400 bar (6.000 psi)
Polaris Si-A 3 µm, 5 µm, 10 µm 400 bar (6.000 psi)
Pursuit XRs-Si 3 µm, 5 µm, 10 µm 400 bar (6.000 psi)
Poroshell 120 EC-CN
Poroshell 120 HILIC
2.7 µm 600 bar (9.000 psi)
Maximaler Druck – Säulen bis zu 9,4 mm ID
DEUTSCH

• Neue Säulen enthalten ein Gemisch organischer Lösungsmittel. Die
Lösungsmittelzusammensetzung in Ihrer Säule finden Sie im QC-Testreport. Es
sollte darauf geachtet werden, dass keine mobile Phase durch die Säule läuft, die
zu einer Niederschlagsbildung oder Emulsion führen kann.
• Agilent Normalphasensäulen sind mit Wasser und allen gängigen organischen
Lösungsmitteln kompatibel.
• Die Verwendung einer Vorsäule wird zum Schutz der Säule und zur Verlängerung
ihrer Lebensdauer empfohlen.
• Zurzeit nicht benutzte Säulen sollten keinen hohen pH-Werten oder erhöhten
Temperaturen ausgesetzt werden.
• Vermeiden Sie die Nutzung dieser Säule außerhalb des für die Säulenphase
empfohlenen pH-Bereichs (siehe nächste Seite). Die Lebensdauer verkürzt
sich, wenn die Säule außerhalb der empfohlenen pH- und Temperaturbereiche
betrieben wird.
Tipps für beste chromatografische Ergebnisse
• Optimieren Sie Ihr Instrument, indem Sie die Längen der Kapillaren zwischen den
Modulen minimieren, um zusätzliches Säulenvolumen und Bandenverbreiterung
zu reduzieren. Verwenden Sie rote Kapillaren mit einem Innendurchmesser von
0.12mm für Fast-LC-/Hocheffizienzsäulen. Weitere Informationen zu Kapillaren
erhalten Sie unter agilent.com/chem/lccapillaries.
• Achten Sie bei der Verwendung von Normalphasensäulen darauf, dass
Rotordichtungen, Pumpendichtungen, Kapillaren und alle weiteren Komponenten
des LC-Instruments mit Normalphasen-Lösungsmitteln kompatibel sind.
• Stellen Sie sicher, dass die Datenerfassungsrate für Ihre Säule optimiert ist.
Verwenden Sie für Fast-LC-Säulen (Poroshell 120, RRHT und RRHD) eine höhere
Datenerfassungsrate.
• Verwenden Sie für eine optimale Leistung Agilent-zertifizierte Lampen in Ihren
Flüssigkeits-Chromatografiegeräten.
• Filtrieren Sie Ihre Probe oder führen Sie eine für Ihre Probe geeignete andere
Probenvorbereitung durch. Weitere Informationen finden Sie unter
agilent.com/chem/sampleprep .

ARBEITEN MIT NORMALPHASENSÄULEN
Jede Normalphasensäule wird vor der Lieferung getestet und in einem
Normalphasen-Testeluent versandt, ausgenommen Säulen der Typen ZORBAX
Eclipse XDB-CN, Poroshell 120 EC-CN, Poroshell 120 HILIC und ZORBAX HILIC
Plus, die in Umkehrphasen-Lösungsmitteln versandt werden. Es muss unbedingt
darauf geachtet werden, dass die Säule vor der Verwendung ordnungsgemäß
äquilibriert wurde. Dies stellt die Reproduzierbarkeit von Analyse zu Analyse sicher
und verhindert Abweichungen bei der Retentionszeit.
Phase Empfohlener
pH-Bereich
Maximale
Betriebstemperatur
Vorgeschlagene
Betriebstemperatur
ZORBAX NH2pH 2.0 bis 7.5 60 °C 30 °C
ZORBAX Rx-SIL
ZORBAX SIL
Poroshell 120
HILIC*†
ZORBAX HILIC
Plus*†
pH 1.0 bis 8.0 Im Normalfall nur
begrenzt durch die
Temperaturgrenz-
werte der mobilen
Phase
ZORBAX CN pH 2.0 bis 8.0 60 °C 30 °C
ZORBAX Eclipse
XDB-CN*
pH 2.0 bis 9.0 60 °C 30 °C
Polaris NH2pH 2.0 bis 8.0 60 °C 30 °C
Polaris Si-A pH 1.5 bis 10.0 60 °C 30 °C
Pursuit XRs Si pH 2.0 bis 8.0 60 °C 30 °C
Poroshell 120
EC-CN*
pH 2.0 bis 8.0 60 °C 30 °C
*Wird in Umkehrphasen-Lösungsmitteln versandt.
†Weitere Informationen siehe Abschnitt „Arbeiten mit HILIC”.
Betriebsparameter von Normalphasensäulen:
pH-Wert und Temperatur
Der Betrieb der Säule im Bereich der pH- und Temperaturgrenzwerte hat
signifikanten Einfluss auf die Lebensdauer der Säule.
DEUTSCH

DEUTSCH
Hinweis: Alle Packungen auf Silikabasis sind in wässrigen mobilen Phasen mit
einem pH-Wert>6 löslich. Falls Sie dennoch Säulen auf Silikabasis bei einem
pH-Wert > 6 verwenden, dann erhalten Sie eine längere Lebensdauer, wenn eine
niedrigere Temperatur (max. 40 °C) und niedrigere Pufferkonzentrationen zwischen
0.01 bis 0.02 M verwendet werden.
Hinweise zur Methodenentwicklung für Normalphasensäulen
Die stationäre Phase ist polar und wird am besten mit nicht polaren mobilen Phasen
wie Methylenchlorid/Hexan- oder Isopropanol/Hexan-Gemische verwendet.
Ein höherer Anteil an der polaren Komponente in diesen Gemischen verkürzt
normalerweise die Retentionszeit der Probe.
Säulentyp Hinweise zur Methodenentwicklung
ZORBAX NH2
Polaris NH2
Die Retention nimmt in dem Maß ab, in dem die Polarität der
mobilen Phase zunimmt.
Zur Äquilibrierung sind nach dem Wechsel der Zusam-
mensetzung der mobilen Phase einige Säulenvolumen
notwendig. Die Anzahl der erforderlichen Säulenvolumen
hängt vom verwendeten System ab und kann bis zu 50 bis
100 Säulenvolumen betragen.
ZORBAX Rx-SIL
ZORBAX SIL
Pursuit XRs Si
Polaris Si-A
Nicht gebundene Säulen auf Silikabasis reagieren sehr
empfindlich auf Wasserspuren in Lösungsmitteln und der Probe.
Dies sollte beachtet werden, damit die Reproduzierbarkeit der
Methode beibehalten wird. Bei Einsatz einer Gradientenelution
sollten sowohl primäre als auch sekundäre Lösungsmittel
mit einem Alkohol oder Acetonitril modifiziert werden und
mindestens 30 Säulenvolumen von Lösungsmittel sollten nach
Abschluss jeder Analyse durch die Säule fließen.
Spülen Sie beim Wechsel der Lösungsmittel die Säule zuerst mit
einem beidseitig mischbaren Lösungsmittel wie Isopropylalkhol.
Poroshell 120 EC-CN
ZORBAX Eclipse
XDB-CN ZORBAX CN
Poroshell 120 EC-CN- und ZORBAX Eclipse XDB-CN-Säulen
werden mit Umkehrphasen-Lösungsmitteln versandt,
können nach dem Spülen mit Isopropanol aber auch in
Normalphasenanwendungen verwendet werden.
Die Retention nimmt in dem Maß ab, in dem die Polarität der
mobilen Phase zunimmt.
Die schnelle Äquilibration dieser gebundenen Phase mit der
mobilen Phase macht es oft einfacher, diese Säule statt Säulen
auf Silikabasis zu verwenden, speziell für die Gradientenelution.

Reinigen Ihrer Säule/Erweitern der Säulenlebensdauer:
Normalphasensäulen
Für die Normalphase empfehlen wir den Einsatz organischer Lösungsmittel.
Verwenden Sie mindestens 20 Säulenvolumen jedes Lösungsmittels, vorausgesetzt,
Ihre Säule entspricht der in der Regel zur Analyse verwendeten Abmessung mit
4.6 x 250 mm, 50 mL. Versuchen Sie es mit diesen Lösungsmitteln:
1. 50% Methanol: 50% Chloroform
2. 100% Ethylacetat
Das Reinigen einer im Normalphasenmodus verwendeten Säule kann vom
Probentyp abhängen. Falls diese Lösungsmittel nicht funktionieren, wenden Sie sich
an Agilent, sodass wir ein Lösungsmittel empfehlen können, das in Verbindung mit
Ihrer Anwendung und Probenmatrix vielleicht wirksamer ist.
Empfehlung zur Lagerung: Normalphasensäulen
Normalphasensäulen können in der Regel langfristig in ihren eigenen
mobilen Phasen gelagert werden. Vor der Lagerung der Säule sollten die
Endverschraubungen fest mit Endverschlüssen verschlossen werden, um ein
Austrocknen der Packung zu verhindern.
ARBEITEN MIT HILIC-SÄULEN
HILIC ist eine Methode zur Trennung polarer Analyten, die auf typischen
Umkehrphasensäulen unzureichende Ergebnisse liefern. Agilent ZORBAX
Rapid Resolution High Definition (RRHD) HILIC Plus- und Poroshell 120 HILIC-
Säulen sind nicht gebundene, Säulen auf Silikabasis, die in Acetonitril:Wasser
oder Acetonitril versandt werden und zur Nutzung für HILIC-Trennungen bereit
sind. Wie Normalphasensäulen erfordern HILIC-Säulen mehr Äquilibration als
Umkehrphasensäulen. Beachten Sie, dass ZORBAX Rx-Sil-, ZORBAX Sil- und
ZORBAX NH
2
-Säulen auch für HILIC-Anwendungen verwendet werden können.
Um diese Säulen für den HILIC-Modus zu verändern, spülen Sie sie zuerst mit
Isopropylalkohol.
DEUTSCH

ZORBAX Rapid Resolution
High Definition (RRHD)
HILIC Plus
Poroshell 120 HILIC
HILIC-Anwendungen werden vor allem zur
Analyse polarer Verbindungen verwendet, die auf
Umkehrphasensäulen unzureichende Ergebnisse
erzielen.
Äquilibrieren Sie vor der ersten Analyse Ihre Säule mit
Acetonitril, das mit 30-40% Wasser verdünnt wurde.
Die Äquilibration kann 20-50 Säulenvolumen erfordern.
Eine typische mobile Phase besteht aus
Acetonitril:Wasser mit einem 5-10 mM Acetat-
oder Formiatpuffer. Setzen Sie die wässrige/
Pufferkomponente herab, um die Retention zu steigern.
Hinweise zur HILIC-Methodenentwicklung
Betriebsrichtlinien: HILIC
• Agilent HILIC-Säulen werden in Acetonitril:Wasser oder Acetonitril
versandt.
• Agilent HILIC-Säulen sind mit Wasser und allen gängigen organischen
Lösungsmitteln kompatibel.
• Alle Packungen auf Silikabasis sind in wässrigen mobilen Phasen mit
einem pH-Wert>6 löslich. Die Löslichkeit des Silikas wird auch durch
erhöhte Temperaturen gesteigert. Bei Verwendung der ZORBAX RRHD
HILIC Plus- oder Poroshell 120 HILIC-Säule über pH 6 und 40 °C wird die
Lebensdauer der Säule reduziert.
Säulenname pH-Bereich Maximale
Temperatur
Vorgeschlagene
Temperatur
ZORBAX Rapid
Resolution High Definition
(RRHD) HILIC Plus
ZORBAX HILIC Plus HPLC
Poroshell 120 HILIC
pH 1.0 bis
8.0
40 °C 30 °C
HILIC-Säulenparameter
Der Betrieb der Säule im Bereich der pH- und Temperaturgrenzwerte hat
signifikanten Einfluss auf die Lebensdauer der Säule.

Reinigen Ihrer Säule/Erweitern der Säulenlebensdauer:
HILIC-Säulen
Proben sollten vor Injektion in die Säule gefiltert werden. Dies ist für die
ZORBAX RRHD HILIC Plus-Säule besonders wichtig, da die Einlassfritte
der Säule nominell 0.5 µm aufweist. Die Proben sollten daher durch
einen 0.2-μm-Probenfilter gefiltert werden. Wenn der Lösungsmittelfluss
anscheinend behindert wird (ungewöhnlich hoher Säulenrückdruck),
überprüfen Sie zuerst, ob der Lösungsmittelfluss bis zum Säuleneinlass
blockiert ist. Wenn die Blockade vor der Säule liegt, ersetzen Sie die
entsprechende verstopfte Kapillare bzw. den Filter. Wenn die Säule verstopft
ist, kann Poroshell 120 HILIC mit 20-30 Säulenvolumen der mobilen Phase
rückgespült werden. Die RRHD HILIC-Säule kann nicht rückgespült werden.
Um eventuelle Verunreinigungen aus der Säule zu entfernen, spülen Sie die
Säule mit einem starken Lösungsmittel, im HILIC-Modus mit Wasser.
Empfehlung zur Lagerung: HILIC-Säulen
Acetonitril:Wasser (95:5) wird für HILIC-Säulen als Lösungsmittel zur
langfristigen Lagerung empfohlen. Unter Umständen muss die Säule mit
Acetonitril:Wasser (60:40) gespült werden, um vor dem Wechsel zum
Lagerungslösungsmittel eventuelle Verunreinigungen zu entfernen. Vor der
Lagerung der Säule sollten die Endverschraubung fest mit Endverschlüssen
verschlossen werden, um ein Austrocknen der Säulenpackung zu verhindern.
Kurzfristig können Säulen in den meisten mobilen HILIC-Phasen gelagert
werden. Zum Schutz sollten jedoch Salze aus Instrument und Säule entfernt
werden, indem die Säule mit derselben mobilen Phase ohne Puffer gespült
wird (z. B. durch Verwendung von 90:10 ACN:H2O, um eine gepufferte
mobile Phase 90:10 ACN:0,01M-Formiat zu entfernen). Bei Verwendung
dieses Ansatzes ist die Reäquilibration mit der originalen mobilen
Phase schneller, dennoch sollten 3-6 Injektionen zur Überprüfung der
Säulenäquilibrierung durchgeführt werden.
DEUTSCH

Cette brochure contient des informations générales
applicables à l'ensemble des colonnes phase normale
ZORBAX, Pursuit et Polaris ainsi qu'aux colonnes HILIC. Les
premières parties fournissent des informations communes
aux colonnes phase normale et aux colonnes HILIC. Certains
paramètres méthodologiques et certaines instructions
d'entretien étant différents selon le type de colonne, ils sont
décrits séparément dans les dernières pages de la brochure.
Pour plus d'informations sur la colonne ou la série de
colonnes que vous possédez, consultez le site
agilent.com/chem/columnchoices
Mise en route
Un rapport sur les performances QC des colonnes, contenant un
chromatogramme test, accompagne chaque colonne Agilent.
L'instrument de test QC ayant été modifié (optimisé) par rapport à
l'instrument standard afin de minimiser les volumes "extra-colonne",
il peut être différent du système utilisé dans votre laboratoire. Cela
permet une meilleure évaluation de la colonne et garantit une
meilleure conformité du produit. Un système de CPL optimisé pour
les colonnes à faible volume génèrera des résultats similaires au
chromatogramme présenté sur votre rapport des performances QC.